2016 Fiscal Year Annual Research Report
Big angiotensin-25の生体内での役割と診断薬としての可能性
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26293191
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| Research Institution | University of Miyazaki |
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Principal Investigator |
北村 和雄 宮崎大学, 医学部, 教授 (50204912)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
鶴田 敏博 宮崎大学, 医学部, 講師 (10389570)
加藤 丈司 宮崎大学, フロンティア科学実験総合センター, 教授 (20274780)
桑迫 健二 宮崎大学, フロンティア科学実験総合センター, 准教授 (20381098)
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| Project Period (FY) |
2014-04-01 – 2018-03-31
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| Keywords | Bang-25 / アンジオテンシン / バイオマーカー / 糖鎖ペプチド / 生合成酵素 / 抗Bang-25抗体 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
Big angiotensin-25 (Bang-25)はヒト尿中に存在する最も主要なアンジオテンシン関連ペプチドとして、ごく最近研究代表者らにより発見された糖鎖が付加した特徴的な構造をした新規ペプチドである。本ペプチドはキマーゼにより速やかにアンジオテンシII（Ang II）に変換されるが、レニンに対しては抵抗性がある。また、Bang-25は心筋、腎臓糸球体のポドサイトや副腎髄質をはじめ、ヒト生体内に幅広く分布している。そこで本研究では、①Bang-25の生体内での役割や生合成機構を明らかにすることで新たな循環調節機構の存在を明らかにする。更にBang-25の定量法を確立し、循環器疾患患者の血中や尿中Bang-25を検討することを目的として行った。
Bang-25の生体内での役割や生合成機構を明らかにするため、パーキンエルマー社のAmplified Luminescent Proximity Homogeneous Assay（Alpha）LISA法を利用してBang-25の定量法を確立した。この測定系を用いてヒトの尿・血液・組織中のBang-25濃度を測定した結果、尿中のBang-25が血中よりも数十倍多い事が明らかとなった。また、腎臓疾患患者を含むヒト尿中のBang-25を測定した結果、糸球体濾過量（eGFR）と負の相関が見られたが、尿タンパクとは相関していなかった。つまり、尿中Bang-25は腎疾患における腎障害の程度を反映していると考えられた。
一方、本法は尿のSEPPAKによる脱塩が必要なため、多くのサンプルを測定することができない。そのため、新たな簡便な測定系を確立するため、合成Bang-25を抗原とした抗体を作成した。今後はこの抗体を利用してRIA系もしくはAlphaLISA法を確立したい。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
Bang-25の定量法についてAlpha LISA法を確立し、尿サンプルの前処理後に測定した。腎疾患ばかりでなく循環器疾患、消化器疾患、その他に関しても新たな知見がでつつある。これまでの研究成果により、Bang-25の定量に関しては、腎障害におけるバイオマーカーになりうる可能性が示唆された。
また、高血圧患者に関して、宮崎県内の開業医・病院勤務医の協力を得て、1000検体近くの尿サンプルを入手しBang-25の定量を行った。今後、これらの患者の経過を観察していくことで尿中Bang-25濃度と腎予後についての検討を行いたい。
現在も本法で各種疾患の測定を継続しているが、本法は尿のSEPPAKによる脱塩が必要なため、多くのサンプルを測定することができない。そのため、新たな簡便な測定系を確立するため、合成Bang-25を抗原とした抗体を作成できた。本抗体はBang-25の糖鎖を含む全体を認識しており、今後の研究推進の有力なツールとなる。
Bang-25の薬理作用を見る検討では、ラットを用いた急性投与研究を行ったが、顕著な作用は認められなかった。ラットにはBang-25に相当するものはないと考えられるので種による差があるのかも知れない。今後は充分量のBang-25を合成できたので慢性投与研究やマウスやヒト型キマーゼを有すると言われているハムスターを用いて研究を進めたい。
以上より本研究はおおむね順調に進展しているといえる。
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| Strategy for Future Research Activity |
今年度は、昨年度までの研究を継続するとともに、研究目的を達成するために以下に示すように研究も進めて行く。
①手術時に得られた病的組織を用いてBang-25が組織中でAng IやAng IIに変換されるかどうかの検討を行う。その際にレニン・アンジオテンシン系阻害薬やキマーゼ阻害薬を用いることによって病態におけるBang-25のレニン・アンジオテンシン系構成因子としての意義を明らかにする。②ラット、マウス、ハムスターを用いて合成Bang-25の慢性投与における血行動態（血圧、心拍数、末梢血管抵抗、尿量等）の変化を観察する。またレニン・アンジオテンシン系阻害剤やキマーゼ阻害薬が及ぼす影響を観察する事でBang-25の生理学的・薬理学的作用を検討する。③Bang-25の多い組織の抽出物を用いてアンジオテンシノーゲンからBang-25に変換する酵素の活性を測定する。④各種疾患（循環器疾患、腎疾患、その他）患者や検診受診者を対象に、Bang-25の血中濃度と尿中濃度の測定を行い、レニン・アンジオテンシン系因子をはじめ各種の臨床パラメーターと比較検討する。⑤新たに確立した抗Bang-25抗体を用いてBang-25の分布を検討するとともに、前処置をしないで測定可能な測定系の確立を目指す。
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