2014 Fiscal Year Annual Research Report
新規低侵襲パーソナル3次元表皮の応用―アトピー性皮膚炎新規遺伝子異常の探索―
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26293255
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| Research Institution | Chiba University |
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Principal Investigator |
松江 弘之 千葉大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (10250424)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
鎌田 憲明 千葉大学, 医学部附属病院, 講師 (00334186)
松岡 悠美 千葉大学, 医学(系)研究科(研究院), 助教 (10402067)
神戸 直智 千葉大学, 医学(系)研究科(研究院), 准教授 (50335254)
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| Project Period (FY) |
2014-04-01 – 2017-03-31
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| Keywords | ケラチノサイト / 三次元表皮 / アトピー性皮膚炎 / 責任遺伝子 / 毛包 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
＜毛包角化細胞由来３次元表皮の作製方法の確立と評価＞
毛包由来角化細胞から3次元表皮を作製する基本的技術は、すでに分担研究者の鎌田らが確立し特許を出願した。抜毛の毛包部から毛包由来角化細胞を平面培養し、トリプシン処理後の個別角化細胞を化学樹脂上で培養し、3次元表皮作製へ進む。凍結保存した角化細胞からも同様に3次元表皮の作製に成功した。皮膚由来と毛包由来3次元表皮で、基底層、有棘層、顆粒層、角層が認められ、３次元構造に両者に有意な差は認められなかった。さらに、ケラチンの発現パターンや、フィラグリンの発現パターンを免疫染色で見ると両者に差異は認められなかった。３次元表皮からmRNAを精製し、gene arrayで解析したところ両者の遺伝子発現も極めて似ていた。In Vitro刺激試験を３例の毛包由来３D表皮と市販の３表皮で比較検討したところ、毛包由来の３例での結果はほぼ市販の３D表皮の結果と一致し、この毛包由来の３D表皮はパーソナルは表皮解析に資するものであることが示唆された。現在毛包由来3次元表皮の再現性の実験がほぼ終了し論文としてまとめている。
＜パーソナル毛包角化細胞由来3次元表皮を用いたアトピー性皮膚炎の病因に関与する角化細胞由来新規原因遺伝子の探索＞
また、アトピー性皮膚炎の頭皮からも細菌の混入なく培養する方法を確立でき、アトピー性皮膚炎、正常人の毛包由来3次元を構築に成功し、アトピー性皮膚炎患者と正常人の網羅的遺伝子発現を解析している。また、同時にDNAを抽出し全エクソーム解析も施行し、そのデータを現在解析中である。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
アトピー性皮膚炎にフォーカスして解析している点は順調に進んでいる。
パーソナル毛包角化細胞由来3次元表皮を用いたアトピー性皮膚炎の病因に関与する角化細胞由来新規原因遺伝子の探索として
アトピー性皮膚炎患者と健常人の毛包由来３次元表皮の遺伝子発現の網羅的解析を施行する。従来のgene array (Agilent)に加え、かずさDNA研究所のイルミナHiSeq1000を使用し、RNAシーケンス(RNAseq)ベースでトランスクリプトソームを解析した。また、全エキソーム解析もﾃﾞｰﾀが出始めており、解析中である。
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| Strategy for Future Research Activity |
アトピー性皮膚炎の新規原因遺伝子発現異常と新規遺伝子変異の同定とその評価をまず行い。原因遺伝子として可能性が高い場合はさらに、機能分析を進める予定である。
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[Journal Article] Ultra-pure soft water improves skin barrier function in children with atopic dermatitis: A randomized, double-blind, placebo-controlled, crossover pilot study.2014
Author(s)
Togawaa Y, Kambe N, Shimojob N, Nakano T, Sato Y, Mochizuki H, Tanaka A, Matsuda H, Matsue H
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Journal Title
J Dermatol Sci.
Volume: 76
Pages: 269-71
DOI
Peer Reviewed
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