2016 Fiscal Year Annual Research Report
疾患特異的iPS細胞を用いた睡眠時ブラキシズムの発症メカニズム解明と治療薬の探索
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26293415
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| Research Institution | Showa University |
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Principal Investigator |
馬場 一美 昭和大学, 歯学部, 教授 (80251536)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
美島 健二 昭和大学, 歯学部, 教授 (50275343)
赤松 和土 順天堂大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (60338184)
田中 準一 昭和大学, 歯学部, 助教 (40710166)
松本 貴志 昭和大学, 歯学部, 助教 (00635039)
菅沼 岳史 昭和大学, 歯学部, 准教授 (10196694)
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| Project Period (FY) |
2014-04-01 – 2018-03-31
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| Keywords | 睡眠時ブラキシズム / iPSC / 疾患特異的iPS細胞 / セロトニン / HTR2A / 5-HT2A受容体 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
睡眠時ブラキシズムに伴って生じる過大な咬合力は、顎口腔系への破壊的な作用のみならず、歯科補綴治療の予後を左右するため、より精度の高い診断法と原因療法の確立が求められている。本研究では、睡眠時ブラキシズム特異的なiPS細胞を樹立してセロトニン受容体発現神経細胞へと分化誘導し、疾患由来神経系細胞の表現型の検証と化合物を用いて睡眠時ブラキシズム治療薬のスクリーニングを行うことを目的としている。
平成28年度には、前年度に成功した、睡眠時ブラキシズム患者由来のiPS細胞から分化誘導したセロトニン2A受容体を発現する神経細胞に対して、電気生理学的解析を行っていくことを前提として、誘導した神経細胞中から目的細胞をピックアップするための手法を検討し、目的細胞に特異的に反応するレポーターレンチウイルスを作成することとした。レンチウイルスプラスミドベクターの構造としては、HTR2A promoter(1060bp)とVenus(719bp)、選別のためのAmp耐性遺伝子を、遺伝子組み換えにより組み込んだ。これにより完成したレポーターウイルスを、Neural Stem Cellの接着培養3日目に感染させ、蛍光顕微鏡にて観察した。その結果、Positive-Control細胞(SK-N-SH)とNegative-Control細胞(293T)へのレポーターウイルス感染4日目の状態で、明視野ではそれぞれ細胞の存在を確認でき、293Tでは蛍光反応が確認されなかった一方でSK-N-SHでは蛍光反応が確認され、レポーターウイルスが機能していることを確認し、目的細胞が選別できることが示された。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
適切に機能するレポーターレンチウイルスの作成に非常に時間を費やし、また、iPS細胞の誘導効率が悪かったため、予定していたパッチクランプ法による電気生理学的機能解析まで進めることができなかったため、進捗状況としてはやや遅れている。
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| Strategy for Future Research Activity |
iPS細胞由来神経細胞の誘導効率を改善し、電気生理学的解析を行って、その反応性を疾患群（睡眠時ブラキシズム患者群）と対照群で比較し、検討を行っていく予定である。
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| Causes of Carryover |
目的神経細胞の機能解析を可能にするレポーターレンチウイルスが適切に機能するまで非常に時間がかかり、また、iPS細胞の誘導効率の改善にも時間がかかったため、予定していた電気生理学的機能解析まで進めることができず、次年度使用額が生じた。
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
iPS細胞関連の試薬およびパッチクランプ法のための試薬および化合物などの消耗品に使用する予定である。また、研究成果の専門学会での発表や、専門学術雑誌への論文投稿に使用していく予定である。
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[Journal Article] Effect of clonazepam and clonidine on primary sleep bruxism: a double-blind, crossover, placebo-controlled trial2017
Author(s)
Sakai T, Kato T , Yoshizawa S, Suganuma T, Takaba M, Ono Y, Yoshida Y, Yoshizawa A, Kurihara T, Ishii M, Kawana F, Kiuchi Y, Baba K
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Journal Title
J Sleep Res
Volume: 26
Pages: 73-83
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Effects of citalopram on jaw-closing muscle activity during sleep and wakefulness in mice2016
Author(s)
Ikawa Y, Mochizuki A, Katayama K, Kato T, Ikeda M, Abe Y, Nakamura S, Nakayama K, Wakabayashi N, Baba K, Inoue T
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Journal Title
Neurosci Res
Volume: 113
Pages: 48-55
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Generation of neural cells using iPSCs from sleep bruxism patients with 5-HT2A polymorphism2016
Author(s)
Hoashi Y, Okamoto S, Abe Y, Matsumoto T, Tanaka J, Yoshida Y, Imaizumi K, Mishima K, Akamatsu W, Okano H, Baba K
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Journal Title
J Prosthodont Res
Volume: 印刷中
Pages: 印刷中
DOI
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[Presentation] Establishment of Human Sleep Bruxism Model by Induced Pluripotent Stem Cells.2016
Author(s)
Tozawa Y, Okamoto S, Abe Y, Matsumoto T, Tanaka J, Yoshida Y, Imaizumi K, Mishima K, Akamatsu W, Okano H, Baba K
Organizer
94th General Session & Exhibition of the IADR
Place of Presentation
韓国、ソウル
Year and Date
2016-05-22 – 2016-05-25
Int'l Joint Research
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