2014 Fiscal Year Research-status Report
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26430075
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| Research Institution | Keio University |
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Principal Investigator |
久保 健一郎 慶應義塾大学, 医学部, 講師 (20348791)
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| Project Period (FY) |
2014-04-01 – 2018-03-31
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| Keywords | リーリン / 接着分子 / 大脳皮質 / 発生 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本年度は、細胞間の接着に関わる分子に注目して、それらの分子がリーリンによってどのように制御されて細胞凝集を生じるのかを明らかにしようと試みた。Nカドヘリンやインテグリンは移動中の神経細胞に発現して移動に影響を及ぼすことが報告されている。このうち、特にNカドヘリンついては、その機能阻害によって神経細胞移動が障害されることを見いだした。このNカドヘリンが神経細胞が移動を終えてリーリンに触れる部位で高度の発現が見られることが明らかになったので、その分布の詳細な解析を行った。この際に、リーリン受容体であるVLDLRとApoER2の分布もあわせて解析して明らかにし、報告した。さらに、リーリン刺激の前後でどのような制御を受けるのかを確認するため、リーリン刺激の前後で活性や分布の変化が起こるかどうか、培養細胞表面のNカドヘリン分布やNカドヘリン発現量を、免疫染色法やWesternブロット法を用いて解析を行った。
また、子宮内胎児電気穿孔法を用いたワイルトダイプのNカドヘリンの過剰発現とドミナントネガティブ体のNカドヘリンの過剰発現を行って両者の表現形を比較したほか、RNAiを用いたノックダウンを行い、層構造形成に与える影響を明らかにした。また、発生中マウス脳内に、子宮内胎児電気穿孔法によるリーリン発現プラスミドを導入してリーリンの強制発現を行うと、特徴的な神経細胞の凝集構造がリーリンによって形成されるが、その際に、ワイルトダイプのNカドヘリンやドミナントネガティブ体のNカドヘリンの強制発現、RNAiを用いたNカドヘリンのノックダウンを組み合わせて行い、リーリンによる神経細胞の凝集構造に与える変化を解明した。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
当初の研究計画で１年目の目標にあげた項目について解析が進んだほか、一部は２年目以降に計画した項目についての解析に着手している。
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| Strategy for Future Research Activity |
本年度に得られた結果について再現性の確認やより詳細に条件を振った解析を進める。加えて、当初2年目の研究計画で予定していた通り、Nカドヘリン以外の分子がリーリンの下流で細胞接着を制御しているかどうかを明らかにするため、その候補分子の探索や機能解析に着手する。
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| Causes of Carryover |
当初想定していたよりも少ない実験動物数で所見を得ることができ、また当初は観察のために必要な抗体を見出すために、多種類の抗体を購入して解析を進める予定であったが、免疫染色を行う際に特異的な抗体を早い段階で見いだしたため、まずその抗体を中心に解析をすすめたことにより、物品費が減少した。
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
ウエスタンブロット法を用いた解析や免疫沈降法を用いた解析を進める際に必要な抗体を見出すため、昨年度購入しなかった多種類の抗体を購入するために物品費を使用して、条件検討を行う。また、培養やin vivoでの解析に必要な実験動物数を当初の見積もりよりも増やして十分なN数を確保し、条件検討や詳細な解析を進める。
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Research Products
(16 results)
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[Journal Article] Reelin receptors ApoER2 and VLDLR are expressed in distinct spatio-temporal patterns in developing mouse cerebral cortex. Yuki Hirota, Ken-ichiro Kubo, Kei-ichi Katayama, Takao Honda, Takahiro Fujino, Tokuo T. Yamamoto, and Kazunori Nakajima.2015
Author(s)
Yuki Hirota, Ken-ichiro Kubo, Kei-ichi Katayama, Takao Honda, Takahiro Fujino, Tokuo T. Yamamoto, and Kazunori Nakajima.
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Journal Title
J. Comp. Neurol.
Volume: 523 (3)
Pages: 463-478
DOI
Peer Reviewed / Acknowledgement Compliant
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[Presentation] The novel function of Reelin in the dendrite development and layer formation in the postnatal brain2014
Author(s)
Takao Kohno, Takao Honda, Ken-ichiro Kubo, Yoshimi Nakano, Ayaka Tsuchiya, Tatsuro Murakami, Hideyuki Banno, Kazunori Nakajima, and Mitsuharu Hattori
Organizer
Society for Neuroscience, Neuroscience 2014 Meeting
Place of Presentation
Washington Convention Center, Washington, D.C., U.S.A.
Year and Date
2014-11-15 – 2014-11-19
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[Presentation] 大脳皮質神経細胞接着の制御機構とそのモデル2014
Author(s)
松永友貴, 野田万理子, 村川秀樹, 三浦岳, 久保健一郎, 仲嶋一範
Organizer
新学術領域研究「動く細胞と場のクロストークによる秩序の形成」第4回若手の会
Place of Presentation
火の国ハイツ、熊本（熊本県）
Year and Date
2014-09-04 – 2014-09-05
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