2015 Fiscal Year Research-status Report
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26430075
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| Research Institution | Keio University |
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Principal Investigator |
久保 健一郎 慶應義塾大学, 医学部, 講師 (20348791)
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| Project Period (FY) |
2014-04-01 – 2018-03-31
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| Keywords | リーリン / 接着分子 / Nカドヘリン / 大脳皮質 / 発生 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本年度は、細胞間の接着に関わる分子のうち、Nカドヘリンに注目して、Nカドヘリンがリーリンによってどのように制御されて細胞凝集を生じるのかを明らかにしようと試みた。発生中マウス脳内に、子宮内胎児電気穿孔法によるリーリン発現プラスミドを導入してリーリンの強制発現を行うと、特徴的な神経細胞の凝集構造がリーリンによって形成されるが、本年度は引き続きこの系を用いた解析を行ったところ、凝集構造が形成される際に、ワイルトダイプのNカドヘリンやドミナントネガティブ体のNカドヘリンの強制発現、RNAiを用いたNカドヘリンのノックダウンを組み合わせて行った結果、Nカドヘリンがリーリンによる神経細胞の凝集構造の形成に必須であることが明らかになった。この現象の特異性を検証するために、ノックダウン抵抗性のNカドヘリンを作成し、これを用いたレスキュー実験を開始した。また、神経細胞上のNカドヘリンがリーリン刺激の前後でどのような制御を受けるのかを確認するため、リーリン刺激の前後で活性や分布の変化が起こるかどうか、培養細胞表面のNカドヘリン分布やNカドヘリン発現量を、免疫染色法やWesternブロット法を用いて解析を行うとともに、原子間力顕微鏡を用いた解析も開始した。また、リーリンを加えることによる神経細胞間の接着性の違いをみるための培養系の開発を行い、分散培養系や再凝集回転培養法を用いた検討を行った。加えて、Nカドヘリン以外の分子がリーリンの下流で細胞接着を制御しているかどうかを明らかにするため、その候補分子の探索や機能解析に着手した。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
当初の研究計画で２年目の目標にあげた項目について解析が進んだほか、一部は３年目以降に計画した項目についての解析に着手している。
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| Strategy for Future Research Activity |
本年度に得られた結果について再現性の確認やより詳細に条件を振った解析を進める。加えて、当初３年目の研究計画で予定していた通り、Nカドヘリン以外の分子がリーリンの下流で細胞接着を制御しているかどうかを明らかにするため、NカドヘリンやNカドヘリン以外の候補分子の機能解析を、分散培養系や再凝集回転培養法を用いて行う。
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[Journal Article] Neuronal Heterotopias Affect the Activities of Distant Brain Areas and Lead to Behavioral Deficits.2015
Author(s)
Ishii K, Kubo K, Endo T, Yoshida K, Benner S, Ito Y, Aizawa H, Aramaki M, Yamanaka A, Tanaka K, Takata N, Tanaka KF, Mimura M, Tohyama C, Kakeyama M, Nakajima K.
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Journal Title
J Neurosci.
Volume: 35(36)
Pages: 12432-12445
DOI
Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
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[Journal Article] The COUP-TFII/Neuropilin-2 is a molecular switch steering diencephalon-derived GABAergic neurons in the developing mouse brain.2015
Author(s)
Kanatani S, Honda T, Aramaki M, Hayashi K, Kubo K, Ishida M, Tanaka DH, Kawauchi T, Sekine K, Kusuzawa S, Kawasaki T, Hirata T, Tabata H, Uhlén P, Nakajima K.
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Journal Title
Proc Natl Acad Sci U S A.
Volume: 112(36)
Pages: E4985-4994
DOI
Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research / Acknowledgement Compliant
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[Presentation] Neuronal heterotopias affect the activities of distant brain areas and lead to behavioral deficits2015
Author(s)
Kazuhiro Ishii, Ken-ichiro Kubo, Toshihiro Endo, Keitaro Yoshida, Seico Benner, Yukiko Ito, Hidenori Aizawa, Michihiko Aramaki, Akihiro Yamanaka, Kohichi Tanaka, Norio Takata, Kenji F. Tanaka, Masaru Mimura, Chiharu Tohyama, Masaki Kakeyama, and Kazunori Nakajima.
Organizer
Society for Neuroscience, Neuroscience 2015 meeting
Place of Presentation
Chicago(U.S.A.)
Year and Date
2015-10-17 – 2015-10-21
Int'l Joint Research
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[Presentation] Application of the in utero electroporation technique to the study of the pathological mechanism of focal heterotopias in the brain2015
Author(s)
Ken-ichiro Kubo, Kazuhiro Ishii, Toshihiro Endo, Keitaro Yoshida, Seico Benner, Yukiko Ito, Hidenori Aizawa, Michihiko Aramaki, Akihiro Yamanaka, Kohichi Tanaka, Norio Takata, Kenji F. Tanaka, Masaru Mimura, Chiharu Tohyama, Masaki Kakeyama, and Kazunori Nakajima
Organizer
Cell Symposia: Engineering the Brain – Technologies for Neurobiological Applications
Place of Presentation
Chicago(U.S.A.)
Year and Date
2015-10-15 – 2015-10-16
Int'l Joint Research
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[Presentation] Analyses of the pathological roles of the altered brain cytoarchitectures with ectopic neurons2015
Author(s)
Ken-ichiro Kubo, Kazuhiro Ishii, Toshihiro Endo, Keitaro Yoshida, Seico Benner, Yukiko Ito, Hidenori Aizawa, Michihiko Aramaki, Akihiro Yamanaka, Kohichi Tanaka, Norio Takata, Kenji F. Tanaka, Masaru Mimura, Chiharu Tohyama, Masaki Kakeyama, and Kazunori Nakajima
Organizer
第58回日本神経化学会大会
Place of Presentation
大宮ソニックシティ(埼玉県大宮市)
Year and Date
2015-09-11 – 2015-09-13
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