2015 Fiscal Year Research-status Report
血小板凝集因子ポドプラニンの腫瘍型糖鎖構造の徹底解明と抗体医薬開発
| Project/Area Number |
26440019
|
|---|
| Research Institution | Tohoku University |
|---|
Principal Investigator |
金子 美華 東北大学, 医学(系)研究科(研究院), 准教授 (00323163)
|
|---|
| Project Period (FY) |
2014-04-01 – 2017-03-31
|
| Keywords | CasMab / 腫瘍型糖鎖構造 / 糖転移酵素遺伝子 / 抗体医薬開発 / 糖鎖 |
|---|
| Outline of Annual Research Achievements |
ポドプラニン（PDPN）は、種々の腫瘍に高発現しているムチン型糖タンパク質で、リンパ管マーカーやがん幹細胞群マーカーとして使用されている。申請者らは腫瘍組織由来PDPN上に腫瘍特異的な糖鎖修飾の存在を示すデータを得、腫瘍型PDPNを認識する複数の新規抗体を取得した。本研究では、これらの抗体を利用してPDPN上の腫瘍型糖鎖構造とその生合成機序を徹底的に解明し、さらに、PDPN上の腫瘍特異的糖鎖構造のがん幹細胞形質への関与を調べること、また、得られた腫瘍型糖鎖構造認識抗体の抗体医薬開発の可能性を検証することを目的とした。
本年度は、特定の付加部位に腫瘍特異的糖鎖構造を保持した腫瘍型タンパク質の安定供給源として、N末端にタグを付加した複数種類のN末端欠損PDPN安定発現株を樹立した。N末端欠損PDPNタンパク質の産生・精製等を行う過程で、意図した位置よりC末端側の、特定の部位で切断されたPDPN分子が一定量混入する現象が明らかとなった。このPDPN断片の由来等の解析を行った。
また本年度は、腫瘍型糖鎖構造の生合成に関与する候補糖転移酵素遺伝子のノックアウト(KO)細胞株の樹立を開始した。GnTI-KO細胞株、シアル酸トランスポーターKO細胞株、ガラクトーストランスポーターKO細胞株など、レクチンで表現型の変化を簡単に検出出来る株から着手し、KO株樹立方法を確立した。樹立されたKO細胞株を基にPDPN強制発現株を樹立し、得られた腫瘍型糖鎖構造認識抗体の反応性を確認した。
|
| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
本年度は、腫瘍型糖鎖構造の生合成に関与する候補糖転移酵素遺伝子のノックアウト(KO)細胞の樹立と、樹立した細胞へのPDPN分子の強制発現再構築により、腫瘍特異的PDPN抗体の反応性の検索の実行を目標とした。その結果、KO細胞株における腫瘍特異的PDPN抗体の反応性消失を確認できた。ただし、いくつかの腫瘍特異的PDPN抗体において、予想された反応と異なる反応性を示す場合があったため、引き続き精査中である。また、計画通り、本研究に使用している腫瘍型糖鎖構造認識抗体の抗体遺伝子を取得し、遺伝子改変によりヒト定常領域とのキメラ抗体を作製し、活性を保持していることを確認した。
|
| Strategy for Future Research Activity |
当初の計画通り、本年度に樹立した糖転移酵素遺伝子ノックアウト細胞株を用い、対象とした糖鎖構造の種々のがんの機能的関与（多分化能・自己複製能や浸潤能・運動能など）の解析を行う。作製したキメラ型抗体の抗体依存性細胞障害活性や補体依存性細胞障害活性を調べる。
|
| Causes of Carryover |
平成２７年度は概ね計画通り研究を遂行でき、予定していた予算は順調に使用した。残額が少なく、有効に必要試薬を購入できないため、来年度に持ち越すことにした。
|
| Expenditure Plan for Carryover Budget |
来年度予算と今年度予算残高を合算し、研究を遂行する。
|
Research Products
(18 results)
-
-
[Journal Article] CAR T cells targeting podoplanin reduce orthotopic glioblastomas in mouse brains.2016
Author(s)
Shiina S, Ohno M, Ohka F, Kuramitsu S, Yamamichi A, Kato A, Motomura K, Tanahashi K, Yamamoto T, Watanabe R, Ito I, Senga T, Hamaguchi M, Wakabayashi T, Kaneko MK, Kato Y, Chandramohan V, Bigner DD, Natsume A.
-
Journal Title
Cancer Immunol Res.
Volume: 4(3)
Pages: 259-268.
DOI
Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
-
-
[Journal Article] Antibody and lectin target podoplanin to inhibit oral squamous carcinoma cell migration and viability by distinct mechanisms.2015
Author(s)
Ochoa-Alvarez JA, Krishnan H, Pastorino JG, Nevel E, Kephart D, Lee JJ, Retzbach EP, Shen Y, Fatahzadeh M, Baredes S, Kalyoussef E, Honma M, Adelson ME, Kaneko MK, Kato Y, Young MA, Deluca-Rapone L, Shienbaum AJ, Yin K, Jensen LD, Goldberg GS.
-
Journal Title
Oncotarget.
Volume: 6(11)
Pages: 9045-9060
DOI
Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
-
-
-
-
[Journal Article] Development of Monoclonal Antibody LpMab-10 Recognizing Non-glycosylated PLAG1/2 Domain Including Thr34 of Human Podoplanin.2015
Author(s)
Ogasawara S, Oki H, Kaneko MK, Hozumi Y, Liu X, Honma R, Fujii Y, Nakamura T, Goto K, Takagi M, Kato Y.
-
Journal Title
Monoclon Antib Immunodiagn Immunother.
Volume: 34(5)
Pages: 318-326
DOI
Peer Reviewed / Acknowledgement Compliant
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
