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2014 Fiscal Year Research-status Report

C型インフルエンザウイルスのNS1タンパク質がウイルス増殖を調節する機序の解明

Research Project

Project/Area Number 26460547
Research InstitutionYamagata University

Principal Investigator

本郷 誠治  山形大学, 医学部, 教授 (90229245)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 下平 義隆  山形大学, 医学部, 助教 (30445746)
村木 靖  岩手医科大学, 医学部, 教授 (00241688)
Project Period (FY) 2014-04-01 – 2017-03-31
KeywordsC型インフルエンザ / ウイルス / NS1 / 核移行シグナル / 核外移行シグナル / スプライシング / 細胞内局在
Outline of Annual Research Achievements

平成26年度は、当初の計画で27年度に計画していた平成27年度:NS1がsplicingを促進する機序を解明するという課題の研究を行って下記の成績を得た。
初めに、核内のNS1量を調節する核外移行シグナル(Nuclear Export Signal、NES)の同定を試みた。以前の研究により、109-154番目のアミノ酸領域に核外移行シグナルが含まれる可能性が示唆された(基盤(C)平23-25)。この領域の109-126番目は、NESコンセンサス配列を満たすので、この配列を欠失したNS1変異体のN末端にEGFPを結合させたタンパク質(ΔNES)を293T細胞に一過性に発現させ、局在を解析した。その結果、野生型NS1は主に細胞質に存在するのに対して、ΔNESは主に核内に局在した。従って109-126番目に核外移行シグナルが存在すると示唆された。
次に、核移行シグナル(Nuclear Localization Signal、NLS)の同定を試みた。NLSに多く認められる塩基性アミノ酸のクラスターをNS1の配列上で検索すると、上記のNES領域を挟んだN側領域とC側領域にそれぞれ2箇所ずつが存在した(計4箇所)。これらをN端側からNLS1、NLS2、NLS3、NLS4と名づけた。これらがNLSとして機能するかを検討するために、ΔNESから各NLS候補配列を欠失した変異体(ΔNESΔNLS1, ΔNESΔNLS2, ΔNESΔNLS3, ΔNESΔNLS4)を作製し、293T細胞で一過性に発現させると、ΔNESは主に核内に局在するのに対して、ΔNESΔNLS3, ΔNESΔNLS4は主に細胞質に局在した。ΔNESΔNLS1, ΔNESΔNLS2は核内と細胞質に局在した。以上から、NLS3, NLS4がNS1の核移行シグナルとして働いている可能性が示唆された。

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

3: Progress in research has been slightly delayed.

Reason

平成26年度は、当初の計画で27年度に計画していた平成27年度:NS1がsplicingを促進する機序を解明するという課題の研究を行い、計画の3項目の内、2項目の計画の成果を得た。splicingが行われる核内に局在するための核移行シグナルの同定と核内のNS1量を調節する核外移行シグナルの同定に成功した。

Strategy for Future Research Activity

平成26年度はsplicingが行われる核内に局在するための核移行シグナルの同定と核内のNS1量を調節する核外移行シグナルの同定に成功した。平成27年度はこのシグナルのアミノ酸配列の中で、どのアミノ酸がシグナルとして重要なのかを明らかにする。さらに、当初の26,27年度の研究計画のうち、未実施の研究を遂行する。

Causes of Carryover

研究計画の変更により、研究の進行状況及び予算の使用額に変更が生じたため。

Expenditure Plan for Carryover Budget

遅れ気味の研究の進行状況を取り戻すべく、繰越分の予算も次年度に含めて計画通りに研究を遂行する予定である。

  • Research Products

    (9 results)

All 2014

All Journal Article (4 results) (of which Peer Reviewed: 4 results,  Open Access: 4 results,  Acknowledgement Compliant: 4 results) Presentation (5 results)

  • [Journal Article] Epitope mapping of the hemagglutinin molecule of A/(H1N1)pdm09 influenza virus by using monoclonal antibody escape mutants.2014

    • Author(s)
      Matsuzaki Y, Sugawara K, Nakauchi M, Takahashi Y, Onodera T, Tsunetsugu-Yokota Y, Matsumura T, Ato M, Kobayashi K, Shimotai Y, Mizuta K, Hongo S, Tashiro M, Nobusawa E
    • Journal Title

      J Virol

      Volume: 88 Pages: 12364-12373

    • DOI

      10.1128/JVI.01381-14.

    • Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
  • [Journal Article] Epidemiological information regarding the periodic epidemics of influenza C virus in Japan (1996-2013) and the seroprevalence of antibodies to different antigenic groups.2014

    • Author(s)
      Matsuzaki Y, Sugawara K, Abiko C, Ikeda T, Aoki Y, Mizuta K, Katsushima N, Katsushima F, Katsushima Y, Itagaki T, Shimotai Y, Hongo S, Muraki Y, Nishimura H
    • Journal Title

      J Clin Virol

      Volume: 61 Pages: 87-93

    • DOI

      10.1016/j.jcv.2014.06.017.

    • Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
  • [Journal Article] Molecular epidemiology of enterovirus 71 strains isolated from children in Yamagata, Japan, between 1990 and 2013.2014

    • Author(s)
      Mizuta K, Aoki Y, Matoba Y, Yahagi K, Itagaki T, Katsushima F, Katsushima Y, Ito S, Hongo S, Matsuzaki Y
    • Journal Title

      J Med Microbiol

      Volume: 63 Pages: 1356-1362

    • DOI

      10.1016/j.jcv.2014.06.017.

    • Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
  • [Journal Article] Estimation of secondary measles transmission from a healthcare worker in a hospital setting.2014

    • Author(s)
      Tajima K, Nishimura H, Hongo S, Hazawa M, Saotome-Nakamura AI, Tomiyama K, Obara C, Kato T
    • Journal Title

      Int J Infect Dis

      Volume: 24 Pages: 11-13

    • DOI

      10.1016/j.ijid.2014.03.1377.

    • Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
  • [Presentation] C型インフルエンザウイルスNS1タンパク質の核移行及び核外移行シグナルの解析2014

    • Author(s)
      下平義隆,後藤崇成,松嵜葉子,村木靖,菅原勘悦,本郷誠治
    • Organizer
      第62回日本ウイルス学会
    • Place of Presentation
      パシフィコ横浜会議センター(横浜)
    • Year and Date
      2014-11-10 – 2014-11-12
  • [Presentation] C型インフルエンザウイルスCM2タンパク質のリン酸化がゲノムパッケージングに及ぼす影響2014

    • Author(s)
      後藤崇成,下平義隆,松嵜葉子,村木靖,邵力,菅原勘悦,本郷誠治
    • Organizer
      第68回日本細菌学会東北支部総会
    • Place of Presentation
      東北大学片平さくらホール(仙台)
    • Year and Date
      2014-08-22 – 2014-08-24
  • [Presentation] C型インフルエンザウイルスNS1タンパク質の核移行及び核外移行シグナル2014

    • Author(s)
      下平義隆,後藤崇成,松嵜葉子,村木靖,菅原勘悦,本郷誠治
    • Organizer
      第68回日本細菌学会東北支部総会
    • Place of Presentation
      東北大学片平さくらホール(仙台)
    • Year and Date
      2014-08-22 – 2014-08-23
  • [Presentation] C 型インフルエンザウイルスNS1タンパク質の細胞内輸送シグナルの解析2014

    • Author(s)
      下平義隆,後藤崇成,松嵜葉子,村木靖,菅原勘悦,本郷誠治
    • Organizer
      第28回インフルエンザ研究者交流の会
    • Place of Presentation
      鳥取市総合福祉センターさざんか会館(鳥取)
    • Year and Date
      2014-07-04 – 2014-07-06
  • [Presentation] 山形におけるエンテロウイルス71型の分子疫学(1990~2013年)2014

    • Author(s)
      水田克巳,松嵜葉子, 本郷誠治
    • Organizer
      第55回日本臨床ウイルス学会
    • Place of Presentation
      ロイトン札幌(札幌)
    • Year and Date
      2014-06-14 – 2014-06-15

URL: 

Published: 2016-05-27  

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