2014 Fiscal Year Research-status Report
キナーゼ阻害剤等低分子化合物を用いたB型肝炎ウイルス感染複製機構の解析
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26460565
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| Research Institution | National Institute of Infectious Diseases |
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Principal Investigator |
渡士 幸一 国立感染症研究所, ウイルス第二部, 主任研究官 (40378948)
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| Project Period (FY) |
2014-04-01 – 2017-03-31
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| Keywords | ウイルス / HBV / 微小管 / 複製 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究ではテトラサイクリンの除去によってB型肝炎ウイルス(HBV)複製を誘導できる細胞株を用いて、HBV複製を抑制する低分子化合物のスクリーニングをおこなった。その結果、細胞毒性を示すことなく培地中HBV DNAを大きく減少させる複数の化合物を同定した。このうち再現よくまた用量依存的に細胞外HBV DNAを減少させた化合物に着目したところ、すでに微小管合成を阻害することが知られているコルヒチンやノコダゾール、ビンブラスチンなどがHBV DNA減少作用を有することが判明した。これらを処理したHBV複製培養細胞においては実際に、線維上の微小管が破壊されていたことより、HBV複製過程に機能的微小管が必要であることが示唆された。また微小管がHBV生活環のどの段階に関わるかを検討したところ、微小管破壊細胞においては細胞外HBV DNAだけではなく、細胞内HBV DNA、キャプシドに内包されるHBV DNA量も同様に減少していた。またこの細胞においてはキャプシドに取り込まれたHBV RNA量も減少させた一方で、HBV coreプロモーター依存的転写活性、細胞内総HBV RNA量、HBV coreタンパク質総発現量には大きな変化がなかった。一方、coreが多量体化したキャプシド量は大きく減少していた。以上のことより、機能的微小管はHBV coreタンパク質の多量体化、それに引き続くHBV RNAのキャプシドへの取り込みおよびHBV DNA産生に役割を果たすことが示唆された。これらの知見は細胞環境を利用したHBV複製機構の一端を示したものであり、今後さらなるメカニズム解析が望まれる。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
今回の結果より機能的微小管がHBV DNA産生過程、特にHBV coreタンパク質多量体化に必要であることが示唆された。これまでcore多量体化およびHBV RNAの取り込みが細胞内のどのような画分で行われているかに関してはほとんど明らかになっていない。本研究結果は、core多量体化／HBV RNA取り込みが微小管上で起こること、あるいはcore多量体化に必要な構成成分が微小管輸送によって供給されることを示唆するものである。本研究結果は国内外の学会ですでに成果発表をおこない、また近々論文作成も予定している。このように本研究は当初の予定通りに順調に研究が進行している。
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| Strategy for Future Research Activity |
微小管がHBV core動態と相互作用する機構はいまだ明らかではなく、次年度に解析する予定である。また本年度見られた知見が実際のHBV感染細胞においても認められるかどうか、またHBV遺伝子型によってその制御が異なるかどうかを合わせて検討する。以上の検討により機能的微小管によるHBV複製過程制御の生理的意義およびその一般性に関して考察する。
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| Causes of Carryover |
これまで使用していた実験系に必要な試薬が枯渇し、新たに実験系を構築する必要性が生じた。そのため本検出系に関連する試験およびまとまった試薬の購入を次年度におこない、条件検討および実験系構築後にアッセイをおこなうこととした。
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
本年度に使用予定で使用しなかった分の研究費は次年度に使用することとし、研究目的達成のため効率的な研究遂行を図る。
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Research Products
(55 results)
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[Journal Article] Novel robust in vitro hepatitis B virus infection model using fresh human hepatocytes isolated from humanized mice2015
Author(s)
Ishida Y, Yamasaki C, Yanagi A, Yoshizane Y, Fujikawa K, Watashi K, Abe H, Wakita T, Hayes CN, Chayama K, Tateno C
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Journal Title
Am J Pathol
Volume: 185
Pages: 1275-1285
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] The RNA Sensor RIG-I Dually Functions as an Innate Sensor and Direct Antiviral Factor for Hepatitis B Virus2015
Author(s)
Sato S, Li K, Kameyama T, Hayashi T, Ishida Y, Murakami S, Watanabe T, Iijima S, Sakurai Y, Watashi K, Tsutsumi S, Sato Y, Akita H, Wakita T, Rice CM, Harashima H, Kohara M, Tanaka Y, Takaoka A
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Journal Title
Immunity
Volume: 42(1)
Pages: 123-132
DOI
Peer Reviewed / Acknowledgement Compliant
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[Journal Article] Dysregulation of retinoic acid receptor diminishes hepatocyte permissiveness to hepatitis B virus infection through modulation of sodium taurocholate cotransporting polypeptide (NTCP) expression2015
Author(s)
Tsukuda S, Watashi K, Iwamoto M, Suzuki R, Aizaki H, Okada M, Sugiyama M, Kojima S, Tanaka Y, Mizokami M, Li J, Tong S, Wakita T
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Journal Title
J Biol Chem
Volume: 290(9)
Pages: 5673-5684
DOI
Peer Reviewed / Acknowledgement Compliant
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[Presentation] Japanese Encephalitis Virus-subviral particles harboring HCV neutralization epitopes induce neutralizing antibodies against HCV2014
Author(s)
Saga R, Fujimoto A, Watanabe N, Matsuda M, Hasegawa M, Watashi K, Aizaki H, Nakamura N, Konishi E, Kato T, Takeyama H, Wakita T, Suzuki R
Organizer
21th International Symposium on Hepatitis C Virus and Related Viruses
Place of Presentation
Banff (Canada)
Year and Date
2014-09-09 – 2014-09-09
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[Presentation] Single domain intrabodies against HCV core inhibit viral propagation and core-induced NF-kB activation2014
Author(s)
Suzuki R, Saito K, Matsuda M, Sato M, Kanegae Y, Watashi K, Aizaki H, Chiba J, Saito I, Wakita T, Suzuki T
Organizer
21th International Symposium on Hepatitis C Virus and Related Viruses
Place of Presentation
Banff (Canada)
Year and Date
2014-09-09 – 2014-09-09
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[Presentation] NS5A-associated membrane protein, embryonic lethal, abnormal vision, drosophila-like 1, regulates hepatitis C virus RNA synthesis and translation2014
Author(s)
Goto K, Fujimoto A, Watashi K, Suzuki R, Yamagoe S, Moriya K, Yotsuyanagi H, Koike K, Suzuki T, Miyamura T, Wakita T, Aizaki H
Organizer
21th International Symposium on Hepatitis C Virus and Related Viruses
Place of Presentation
Banff (Canada)
Year and Date
2014-09-09 – 2014-09-09
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[Presentation] Characterization of a culture system reproducing the NTCP-mediated HBV entry and its application to drug development2014
Author(s)
Watashi K, Iwamoto M, Sluder A, Matsunaga S, Ryo A, Morishita R, Kwon ATJ, Suzuki H, Tsukuda S, Suzuki R, Aizaki H, Borroto-Esoda K, Sugiyama M, Tanaka Y, Mizokami M, Wakita T
Organizer
2014 International Meeting on the Molecular Biology of Hepatitis B Viruses
Place of Presentation
Los Angeles (USA)
Year and Date
2014-09-03 – 2014-09-03
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