2016 Fiscal Year Annual Research Report
Phosphorylation of ATBF1 and its intracellular localization in malignant mestothelioma - investigation of the association with malignant behavior
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26460660
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| Research Institution | Kanazawa Medical University |
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Principal Investigator |
湊 宏 金沢医科大学, 医学部, 教授 (10293367)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
竹上 勉 金沢医科大学, 総合医学研究所, 教授 (10113490)
中田 聡子 金沢医科大学, 医学部, 助教 (30569091)
三浦 裕 名古屋市立大学, 大学院医学研究科, 准教授 (90285198)
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| Project Period (FY) |
2014-04-01 – 2017-03-31
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| Keywords | 悪性中皮腫 / ATBF1 / 癌抑制遺伝子 / 培養細胞 / 細胞内局在 / 核細胞質移行 / 遺伝子ノックアウト |
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| Outline of Annual Research Achievements |
悪性中皮腫における癌抑制遺伝子ATBF1の役割を探索する目的で、ヒト悪性中皮腫細胞株3種(NCI-H2452、MSTO-211H、NCI-H28)と良性中皮細胞株1種(Met-5A)の培養を継続し、ATBF1遺伝子変化との関連性を探索した。Met-5Aのそれぞれの亜株に、ATBF1のshRNA発現レトロウイルスを加え、ATBF1のノックダウンモデルを作成した。また、同様にMet-5AにCRISPR処理を行い、ATBF1のノックアウトモデルを作製した。ATBF1遺伝子のノックアウト、ノックダウンに関してはそれぞれ定量PCRを用いてATBF1mRNAの減少を確認した。またセルブロックを作製し、抗ATBF1抗体(D1-120)を用いてATBF1量の発現が低下していることを確認した。Met-5Aを用いCRISPRによるATBF1ノックダウン3株を作製することができた。これらのMet-5A亜株3種とMSTO-211H、NCI-H28細胞にそれぞれLuc遺伝子の導入を行い、EGFPを挿入したもの、全く遺伝子操作を行なわない対照を含めこれらの細胞をヌードマウスの腹腔内に移植した。発光イメージングシステム(IVIS)を用いて経時的に発光量の変化を観察したところ、MSTO-211Hでは一か月後も順調に腹腔内に腫瘍細胞の増殖が確認できたが、Met-5A、NCI-H28株では2週間程度で細胞量が急激に低下し、その後の腫瘍の増殖が確認できなかった。現在のところ、ATBF1のノックダウンのみでは、腫瘍化が確認できておらず、ATBF1のノックダウンのみでは、腫瘍化されない可能性がある。ただし、悪性中皮腫株であるNCI-H28でも移植に成功しておらず、まだ確定的ではない。
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[Journal Article] A diagnostic marker for superficial urothelial bladder carcinoma: lack of nuclear ATBF1 (ZFHX3) by immunohistochemistry suggests malignant progression.2016
Author(s)
Kawaguchi M, Hara N, Bilim V, Koike H, Suzuki M, Kim TS, Gao N, Dong Y, Zhang S, Fujinawa Y, Yamamoto O, Ito H, Tomita Y, Naruse Y, Sakamaki A, Ishii Y, Tsuneyama K, Inoue M, Itoh J, Yasuda M, Sakata N, Jung CG, Kanazawa S, Akatsu H, Minato H, Nojima T, Asai K, Miura Y.
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Journal Title
BMC Cancer.
Volume: 16
Pages: 805
DOI
Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
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