Development of a peptide as a novel therapy for brochial asthma

2017 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 26461565
• Research Institution: The University of Tokyo
• Principal Investigator: 安戸 裕貴 東京大学, 医学部附属病院, 助教 (70422285)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 磯島 豪 帝京大学, 医学部, 講師 (00568230) ; 三牧 正和 帝京大学, 医学部, 教授 (40392419) ; 加藤 元博 国立研究開発法人国立成育医療研究センター, 小児血液・腫瘍研究部, 医長 (40708690)
• Project Period (FY): 2014-04-01 – 2018-03-31
• Keywords: ペプチド療法 / エンドタイプ / 気管支喘息

Outline of Annual Research Achievements

1.当初GSTプルダウンアッセイ法によるPLCβ3C末領域内におけるLyn結合部位が同定されたと考えられたが、その後の実験で再現性が取れなかった。本実験での結果は、過去の報告と整合すると（Xiao W, Yasudo H, Kawakami T et al. Immunity 2011）生理下の条件では、PLCβ3C末領域とlynとの結合は極めて弱いため、再現性が取れないと思われた。
２.１の理由より、TATププチドを用いた実験では、TAT-PLCβ3C末領域内を用いる代わりに、TAT配列を付加したSHP-1およびそのkinase inactive SHP-1(SHP-1-C453S;以下SHP-1 CS mutant, SHP-1-D419A;以下SHP-1 DA mutant)を用いることとした。該当するTATペプチドをニッケルカラム法により精製した。
３.上記TAT-SHP-1,TSHP-1 CS mutantおよびSHP-1 DA mutantを用いてBaF-3細胞（マウスpro-B細胞株）MEC-1細胞,MEC-2細胞（Bリンパ球慢性リンパ球性白血病由来）に導入したところ、TAT-SHP-1,TAT-kinase inactive SHP-1とも細胞増殖抑制効果があった。特にTAT-SHP-1WT、TAT-SHP-1CS mutantの導入では細胞抑制が著明であった。
また、喘息モデルマウスでも、TAT-SHP-1,TAT-kinase inactive SHP-1を事前投与したマウスでは、気管支肺胞液内の好酸球、好中球の減少が認められた。TAT-SHP-1WT、TAT-SHP-1CS mutantの導入では細胞抑制が著明であった。
このことから、SHP-1をターゲットとしたTAT治療法が喘息の治療に効果がある可能性が示唆された。