2015 Fiscal Year Research-status Report
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26462070
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| Research Institution | Yokohama City University |
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Principal Investigator |
遠藤 格 横浜市立大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (60211091)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
廣島 幸彦 横浜市立大学, 医学(系)研究科(研究院), 客員研究員 (60718021)
森 隆太郎 横浜市立大学, 医学部, 助教 (90596412)
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| Project Period (FY) |
2014-04-01 – 2017-03-31
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| Keywords | 膵癌 / 浸潤 / 転移 / 免疫 / 膵炎 / Kras / CRMP4 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
【CRMP4の高発現、低発現の膵癌細胞株を用いたCRMP4リン酸化の意義の検証】
（１）CRMP4安定発現株の樹立：CRMP4-EGFPをCRMP4低発現株であるPanc1に導入し、安定発現株を樹立し、浸潤能、転移能を比較検討する。本年度までに申請者らはPanc1-CRMP4-EGFPの安定発現株の樹立に成功した。また、コントロールとして、Panc1-EGFPの安定発現株を樹立し、浸潤能を比較検討した結果、Panc1-CRMP4-EGFPにおいて、有意にフィロポディア（糸状仮足；細胞の浸潤に不可欠）形成と浸潤能の増加を認めた（未発表データ）。今後は本細胞株を用い、CRMP4リン酸化酵素、阻害薬の効果の検証を行っていく予定である。
【CRMP4ノックアウトマウスを用いた膵癌自然発癌モデルの作成】
KrasG12Dマウスを入手し、CRMP4ノックアウトマウスとの交配、飼育を行っており、少数匹ではあるがCRMP4ノックアウトマウス（Kras/Pdx-Cre/Crmp4-/-）の獲得に成功した。また、慢性膵炎は膵癌発症のリスクが13倍以上になることが報告されており、膵癌発癌の強いリスク因子と考えられ、我々はマウスの急性膵炎モデル、慢性膵炎モデルにおいて主に間質に浸潤したT細胞と一部腺房細胞の細胞質にCRMP4が発現しており、かつリン酸化されていることを解明した（投稿中）。T細胞にCRMP4が発現していることからCRMP4は免疫系にも関わっていることが示唆された。さらに、KrasG12D/Pdx-Creマウスの慢性膵炎モデルにおいて前癌病変を確認した。現在Kras/Pdx-Cre/Crmp4-/-の慢性膵炎モデルの前癌病変と比較し、異形成の程度、病変の進展範囲の比較解析を行っている。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
【CRMP4ノックアウトマウスを用いた膵癌自然発癌モデルの作成】においては、申請者らは少数匹ではあるがCRMP4ノックアウトマウス（Kras/Pdx-Cre/Crmp4-/-）の獲得に成功した。さらにこの発癌モデルを作成する過程で、マウスの急性膵炎モデル、慢性膵炎モデルにおいて主に間質に浸潤したT細胞と一部腺房細胞の細胞質にCRMP4が発現しており、かつリン酸化されていることを解明した（投稿中）。また、KrasG12D/Pdx-Creマウスの慢性膵炎モデルにおいて前癌病変を確認した。現在Kras/Pdx-Cre/Crmp4-/-の慢性膵炎モデルの前癌病変と比較し、異形成の程度、病変の進展範囲の比較解析を行っている。以上のことから、概ね順調に研究は進んでいると判断した。
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| Strategy for Future Research Activity |
【CRMP4の高発現、低発現の膵癌細胞株を用いたCRMP4リン酸化の意義の検証】
前述したように、申請者らはPanc1-CRMP4-EGFPにCRMP4のリン酸化酵素阻害薬であるCDK5阻害薬とGSK3β阻害薬を投与し、Filopodia形成の変化を観察し、CDK5阻害薬の添加ではFilopodia形成に変化を認めなかったが、GSK3β阻害薬を添加すると有意にPanc1-CRMP4-EGFPのFilopodia形成が減少することを発見した。今後は、in vitro（invasion assay）, ex vivo（3D神経浸潤モデル）, in vivo（同所移植モデル）でのGSK3β阻害薬を含む各種リン酸化酵素阻害薬の効果を浸潤能、転移能において評価する。
【CRMP4ノックアウトマウスを用いた膵癌自然発癌モデル実験系】
現在前癌病変（Pancreas intraepithelial neoplasia）までの発生にとどまっているので、引き続き、観察期間の延長あるいは、炎症の惹起を行い、膵癌発生を観察していく。膵癌発生マウスを獲得した場合には、生存期間、腫瘍径、遠隔転移、神経浸潤を比較検討しCRMP4の膵癌進展における役割を詳細に解析する。また各臓器を摘出しCDK5、Sema3A、GSK3βなどの他の蛋白質との関連性を免疫組織化学的に解明していく。また細胞実験系で得られた阻害剤を両モデルマウスに投与し、その膵癌進展における効果を検証する。
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[Journal Article] Tumor-Targeting Salmonella typhimurium A1-R Arrests a Chemo-Resistant Patient Soft-Tissue Sarcoma in Nude Mice.2015
Author(s)
Hiroshima Y, Zhao M, Zhang Y, Zhang N, Maawy A, Murakami T, Mii S, Uehara F, Yamamoto M, Miwa S, Yano S, Momiyama M, Mori R, Matsuyama R, Chishima T, Tanaka K, Ichikawa Y, Bouvet M, Endo I, Hoffman RM.
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Journal Title
PLoS One
Volume: 10
Pages: e0134324
DOI
Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research / Acknowledgement Compliant
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[Presentation] Fluorescence-guided surgery of liver metastasis in orthotopic nude-mouse models2015
Author(s)
Takashi Murakami, Yukihiko Hiroshima, Shinji Miwa, Shuya Yano, Makoto Toneri, Mako Yamamoto, Masashi Momiyama, Takashi Chishima, Kuniya Tanaka, Michael Bouvet, Itaru Endo, Robert M. Hoffman
Organizer
AACR
Place of Presentation
Philadelphia, USA
Year and Date
2015-04-20 – 2015-04-22
Int'l Joint Research
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[Presentation] Curative fluorescence-guided surgery of pancreatic cancer in combination with UVC irradiation in orthotopic mouse models2015
Author(s)
Yukihiko Hiroshima, Ali Maawy, Yong Zhang, Sho Sato, Takashi Murakami, Mako Yamamoto, Fuminari Uehara, Shinji Miwa, Shuya Yano, Masashi Momiyama, Takashi Chishima, Kuniya Tanaka, Michael Bouvet, Itaru Endo, Robert M. Hoffman
Organizer
AACR
Place of Presentation
Philadelphia, USA
Year and Date
2015-04-20 – 2015-04-22
Int'l Joint Research
