Elucidation of novel carcinogenesis / development pathway of bladder cancer by using metabolism-related omics analysis

2016 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 26462410
• Research Institution: Kyoto University
• Principal Investigator: 寺田 直樹 京都大学, 医学研究科, 助教 (60636637)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 松井 喜之 京都大学, 医学研究科, 助教 (00582107) [Withdrawn] ; 小林 恭 京都大学, 医学研究科, 特定病院助教 (00642406)
• Project Period (FY): 2014-04-01 – 2017-03-31
• Keywords: 膀胱癌 / 細胞老化

Outline of Annual Research Achievements

正常尿路上皮細胞と比較して膀胱癌細胞株でPGAMの発現が上昇していることをウェスタンブロッティングを用いて確認した。続いてsiRNAを用いて、浸潤性膀胱癌細胞株J82、253JのPGAM発現抑制株を作成し、MTTassay、colony formation assay、scratch assay、invasion assay、BrdU標識を用いて表現型の変化を確認した。浸潤能・遊走能には変化が見られなかったが、MTTassaｙおよびBrdU標識の結果から、PGAMの発現抑制により増殖能が有意に低下することが示された。一方で非浸潤性膀胱癌細胞株でPGAMの強制発現を種々のベクターを用いて試みたが、安定発現株を樹立できなかった。ここまでの結果より、解糖系酵素PGAMが膀胱癌細胞の増殖に関連することが示唆された。in vivo実験では、まずJ82のPGAM発現抑制株と親株をヌードマウスの皮下に移植したところ、発現抑制株では有意に増殖が抑制された。続いて野生株マウスおよびPGAMトランスジェニックマウスにBBN0.5%を10週投与して発癌率を確認したところ、PGAMトランスジェニックマウス群のほうが高い発癌率であった（WT:8.3%,PGAM-Tg 25.0%）。以上よりPGAMがin vivoにおいて増殖能および発癌過程に関係することが示唆された。ヒト臨床検体での免疫染色では、浸潤の程度とPGAMの染色レベルには相関を認めなかった。