覆髄剤貼付による壊死層形成の役割－３Ｄ培養によるアラーミンの硬組織誘導の解析－

2014 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 26462890
• Research Institution: Kagoshima University
• Principal Investigator: 宮下 桂子 鹿児島大学, 医学部・歯学部附属病院, 研究員 (50636264)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 徳田 雅行 鹿児島大学, 医歯(薬)学総合研究科, 准教授 (20253891) ; 田畑 純 東京医科歯科大学, 医歯(薬)学総合研究科, 准教授 (20243248)
• Project Period (FY): 2014-04-01 – 2017-03-31
• Keywords: 象牙芽細胞 / 石灰化 / アラーミン / 3D 培養

Outline of Annual Research Achievements

水酸化カルシウムを歯髄組織に直接貼付すると「デンティンブリッジ」と呼ばれる硬組織が生じるが、その形成のメカニズムは不明な点が多い。一方、近年、組織内においては、壊死細胞から周辺細胞に向けて放出される「アラーミン」が自然免疫誘導や組織修復に関わることが明らかになってきている。
本研究はアラーミンが硬組織形成にどのように関わるかを、生体を模した 3D 培養にて明らかにすることを最終目的としている。
本年度は、マウス象牙芽細胞を用いて、アラーミンのひとつである HMGB-1 の投与実験をおこない、象牙芽細胞の石灰化が誘導されるかを調べた。0.01～10 μg/ml の HMGB-1 で 11 日間象牙芽細胞を刺激した後、Alizarin Red 染色をおこなったが、石灰化は確認されなかった。
3D 培養については、マウス象牙芽細胞を用いて予備実験をおこない、コラーゲンゲル中にて象牙芽細胞に特徴的な突起様の形態とマーカー遺伝子の発現が確認された。

Current Status of Research Progress

3: Progress in research has been slightly delayed.

Reason

象牙芽細胞を用いた 3D 培養の手法についてはほぼ確立されたが、当初想定していた HMGB-1による直接的な象牙芽細胞の石灰化が確認されなかったため。

Strategy for Future Research Activity

当初想定していた HMGB-1 以外のアラーミンを用いて、象牙芽細胞において石灰化が誘導されるか確認を行う。また 3D 培養で HMGB-1 の局所投与実験をおこない、直接的な石灰化誘導以外に何らかの影響を象牙芽細胞に与えるか検討する。その際、象牙芽細胞に対して石灰化誘導の働きが確認されている BMP-2 との比較検討も行う。

Causes of Carryover

HMGB-1 で直接的な石灰化誘導が確認されなかったため、当初予定していた動物実験が次年度へ持越しとなったため。

Expenditure Plan for Carryover Budget

HMGB-1 以外のアラーミンの投与実験もおこない、石灰化誘導能を有するか確認する。
また、HMGB-1 については RT-PCR 等を行い、石灰化以外の作用を有するか検討する。