2016 Fiscal Year Annual Research Report
Novel production of therapeutic protein by using mammalian cell culture with the addition of chemical chaperones
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26630433
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| Research Institution | Osaka University |
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Principal Investigator |
大政 健史 大阪大学, 工学研究科, 教授 (00252586)
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2014-04-01 – 2017-03-31
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| Keywords | バイオ医薬品 / ケミカルシャペロン / トレハロース / 抗体 / CHO細胞 / 品質管理 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
前年度に引き続き、ケミカルシャペロンであるトレハロースを細胞内に取り込むトランスポーターを導入した、トレハローストランスポーター導入抗体生産性チャイニーズハムスター卵巣（CHO）細胞株について、導入していない元株と、増殖性、生産性、及び、凝集体形成の検討を行った。宿主細胞株であるCHO-K1細胞を元に構築したヒト化IgG抗体を生産する高生産細胞株、及びこの細胞にトレハローストランスポーターを導入した株の比較において、通常の無血清培地を用いた培養と培養開始時に100 mMトレハロースを添加したトレハロース含有培地の二種類の培地で半回分培養を行い、トレハローストランスポーターの導入の効果を検証した。その結果、トレハロース含有培地において、ヒト化IgG抗体を生産する元株と比較して、トランスポーター導入によって構築した細胞株の培養中の到達最大細胞濃度が2倍以上に増加し、トランスポーター導入によって細胞内にトレハロースが取り込まれることにより、浸透圧ストレスの軽減し、到達細胞濃度が向上したと推定された。トレハロース培地における抗体比生産速度は、トランスポーター導入前の元株および、トレハローストランスポーターを導入した株、共に、通常の無血清培地を用いた半回分培養と比較して1.3-1.4倍程度上昇し、トレハロース添加による比生産速度上昇効果は維持された。得られた培養液における抗体の凝集をゲル濾過分析を用いて解析した結果、トレハロース培地ではいずれの細胞株においても凝集体・二量体のピークが減少し、培養中の凝集形成が抑制されていた。以上より、ケミカルシャペロンを添加することにより、細胞の生産する糖タンパク質の品質を改善できること、ならびに添加による細胞増殖性低下については、ケミカルシャペロンに関連するトランスポーター導入によって改善できることが示唆された。
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