2014 Fiscal Year Research-status Report
スキンブロッティング法の原理と応用－ベッドサイドで実施できる皮膚評価技術の確立
| Project/Area Number |
26670914
|
|---|
| Research Institution | The University of Tokyo |
|---|
Principal Investigator |
峰松 健夫 東京大学, 医学(系)研究科(研究院), 講師 (00398752)
|
|---|
| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
森 武俊 東京大学, 医学(系)研究科(研究院), 准教授 (20272586)
真田 弘美 東京大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (50143920)
野口 博史 東京大学, 医学(系)研究科(研究院), 助教 (50431797)
仲上 豪二朗 東京大学, 医学(系)研究科(研究院), 講師 (70547827)
玉井 奈緒 東京大学, 医学(系)研究科(研究院), 助教 (80636788)
|
|---|
| Project Period (FY) |
2014-04-01 – 2016-03-31
|
| Keywords | スキンブロッティング / 皮膚バリア機能 / 角質細胞間脂質 / タイトジャンクション |
|---|
| Outline of Annual Research Achievements |
（１）スキンブロッティング法におけるタンパク質の皮膚透過メカニズムの解明（基礎研究）
角質細胞間脂質の構造的変化：角質細胞間脂質はアルデヒドなどの水溶性固定液では十分に固定されず、また脂溶性固定液では溶出してしまう。そこで当初はCryo TEMによる観察を予定していたが、設備の都合により実施が困難になったため、通常電顕（TEM）による観察を可能にする皮膚組織の新たな固定法（Wet & dry法）の開発に取り組んでいる。アルデヒド系の水溶性固定液により真皮から表皮を固定し、角質をオスミウムあるいはルテニウムのガスにより固定する。これにより、角質細胞間脂質の構造を詳細に観察できるようになった。
顆粒層タイトジャンクションの変化：Claudin-1をターゲットとした免疫蛍光法により、ニトロセルロースメンブレンの貼付によりが、Claudin-1の染色性が著しく低下し、タイトジャンクションの構造が変化していることが示唆された。今後、western blottingによる解析およびTEMによる観察を追加して構造変化を証明する。また、ニトロセルロースメンブレン除去後の回復過程を明らかにする予定である。
（２）スキンブロッティング法を用いた超早期褥瘡検出法の開発（臨床研究）
健常人ボランティアを対象とした準実験研究を実施した。マットレス上に側臥位で2時間臥床させ、臥床直前（ベースライン）、直後、2時間後にスキンブロッティングを実施した。低酸素誘導転写因子HIF-1により発現が促進されるPAI-1のシグナルが2時間の側臥位直後、および2時間後に増加しており、超早期褥瘡検出におけるバイオマーカーとなる可能性が示唆された。
|
| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
1: Research has progressed more than it was originally planned.
Reason
角質細胞間脂質の観察において、予定していたCryo TEMの使用が施設の都合で不可能となったため、新たに通常電顕用の固定法の開発を試みた。これにより顆粒層タイトジャンクションの解析も同時に解析することが可能となったため、当初の予定を前倒しで実施している。
|
| Strategy for Future Research Activity |
平成27年度は、PAI-1などのバイオマーカーを用いたスキンブロッティングによる、褥瘡の超早期検出の可能性を検討する。
|
| Causes of Carryover |
研究の前倒し実施に伴い、50万円の前倒し請求を行った。しかし、タイトジャンクションの解析に使用を予定していた抗体がメーカーで欠品しており、年度内の納品が不可能であったため、3万円強の未使用額が生じた。
|
| Expenditure Plan for Carryover Budget |
速やかに抗体を発注し、届き次第組織学的解析を実施する。
|
-
-
[Journal Article] Hypo-osmotic shock-induced subclinical inflammation of skin in rat model of disrupted skin barrier function.2015
Author(s)
Kishi C, Minematsu T, Huang L, Mugita Y, Kitamura A, Nakagami G, Yamane T, Yoshida M, Noguchi H, Funakubo M, Mori T, Sanada H.
-
Journal Title
Biological Research for Nursing
Volume: 17
Pages: 135-141
DOI
Peer Reviewed
-
-
[Journal Article] Exploring the prevalence of skin tears and skin properties related to skin tears in elderly patients at a long-term medical facility in Japan.2014
Author(s)
Koyano Y, Nakagami G, Iizaka S, Minematsu T, Noguchi H, Tamai N, Yamamoto Y, Kitamura A, Tabata K, Abe M, Murayama R, Sugama J, Sanada H.
-
Journal Title
International Wound Journal
Volume: -
Pages: 印刷中
DOI
Peer Reviewed
-
-
-
-
-
-
[Presentation] Skin blotting: A novel technique to assess physiological skin conditions.2014
Author(s)
Minematsu T, Mugita Y, Koyano Y, Kishi C, Horii M, Oe M, Sugama J, Nakagami G, Noguchi H, Mori T, Sanada H.
Organizer
Australian Wound Management Association (AMWA) 2014
Place of Presentation
Gold Coast (Australia)
Year and Date
2014-05-07 – 2014-05-10
-
