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2016 Fiscal Year Research-status Report

核内受容体PXRの免疫応答における役割の解明

Research Project

Project/Area Number 26860122
Research InstitutionTokyo Metropolitan Institute of Medical Science

Principal Investigator

佐伯 真弓  公益財団法人東京都医学総合研究所, ゲノム医科学研究分野, 主席研究員 (00462771)

Project Period (FY) 2014-04-01 – 2018-03-31
KeywordsT細胞 / PXR
Outline of Annual Research Achievements

平成27年度、構築したPXR発現プラスミドを、Electroporation法により細胞にトランスフェクションしたところ、PXRの発現を確認することができなかった。更に、PXRにより発現が誘導されること、T細胞に発現していることの両方が知られているMDR1の転写制御領域をルシフェラーゼ遺伝子の上流につないだレポータープラスミドと共にトランスフェクションを行い、ルシフェラーゼ活性を測定しても発現の上昇は認められなかった。そこで、PXR発現プラスミドの再構築を行った。具体的には、pEFベクターを制限酵素処理し、pEGFPのマルチクローニングサイトに挿入し、pEF-EGFPベクターを作成した。N末、C末に制限酵素サイトを付加したプライマーを用いて、初めに構築したPXRのプラスミドより、遺伝子の増幅を行った。得られたPCR産物を制限酵素処理後、pEF-EGFPに導入し、pEF-PXR-EGFPプラスミドを作成した。大腸菌に形質転換後、クローンよりプラスミドを調整した。調整したプラスミドを細胞にトランスフェクションし、その後、フローサイトメーターで蛍光強度の解析を行った。PXRをトランスフェクションした細胞では、トランスフェクションしていない細胞と比較し、蛍光強度の増加が認められた。
また、抗原特異的T細胞サブセットから、薬物代謝に関連しているPXR以外の複数の核内受容体の発現を測定したところ、遺伝子Xの発現が認められ、本遺伝子がCD4陽性T細胞の機能に関与している可能性が示唆された。

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

3: Progress in research has been slightly delayed.

Reason

平成27年度、構築したPXR発現プラスミドを用いて、T細胞での役割を解析する予定であったが、遺伝子発現がうまく確認されず、計画を変更して、再検討が必要となったため。

Strategy for Future Research Activity

平成27年度、構築したPXR発現プラスミドを用いたところ、T細胞で発現が確認されたことから、T細胞におけるPXRの役割を解析する。また、再構築中に、薬物代謝に関連しているPXR以外の複数の核内受容体の発現の測定を行ったところ、ある核内受容体の発現増強が確認され、興味深い結果が得られていることから、本遺伝子についても並行して解析を行う予定である。申請者の研究室で、世界初の抗原特異的T細胞クローンマウスを作出されたことから、当初予定していたTgマウスではなく、本マウスを用いて検討を進める。

Causes of Carryover

昨年度、構築したPXR発現プラスミドを用いて、T細胞での役割を解析する予定であったが、遺伝子発現がうまく確認されず、計画を変更して、再検討が必要となったことから、その予算の一部を繰り越した。

Expenditure Plan for Carryover Budget

細胞培養、トランスフェクション、遺伝子発現検出に必要な細胞生物学的試薬の費用
実験に必要なマウスの費用

  • Research Products

    (2 results)

All 2016 Other

All Journal Article (1 results) (of which Peer Reviewed: 1 results,  Acknowledgement Compliant: 1 results) Remarks (1 results)

  • [Journal Article] Th9 cells elicit eosinophil-independent bronchial hyperresponsiveness in mice.2016

    • Author(s)
      Saeki M, Kaminuma O, Nishimura T, Kitamura N, Mori A, Hiroi T
    • Journal Title

      Allergol Int

      Volume: 65 Suppl Pages: S24-29

    • DOI

      doi: 10.1016/j.alit.2016.05.003.

    • Peer Reviewed / Acknowledgement Compliant
  • [Remarks] 花粉症プロジェクトホームページ

    • URL

      http://www.igakuken.or.jp/allergy/

URL: 

Published: 2018-01-16  

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