2014 Fiscal Year Research-status Report
Paused iPSCを用いたiPS細胞誘導機構の解析
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26870074
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| Research Institution | University of Tsukuba |
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Principal Investigator |
西村 健 筑波大学, 医学医療系, 助教 (80500610)
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| Project Period (FY) |
2014-04-01 – 2016-03-31
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| Keywords | iPS細胞 / Klf4 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
初期化因子のうちKlf4の発現量を調節できるベクター（SeVdp(fKOSM)）を用いて、iPS細胞誘導が途中で停止した細胞（paused iPSC）を誘導した。Klf4の発現量を変えることによって、異なる段階で停止したpaused iPSCを用意し、それらについて、DNAマイクロアレイを用いて、全ゲノムの遺伝子発現データを取得した。次に、得られたデータについて、解析ソフトGeneSpringGX10を用いてクラスタリング解析を行い、Klf4発現量依存的に、paused iPSCにおける発現量が異なる遺伝子群を同定した。Klf4依存的に発現量が増加する遺伝子の中には、多能性維持に関わる遺伝子が多く存在したことから、paused iPSCでは、Klf4発現量依存的に多能性が異なることが、全ゲノムの遺伝子発現解析からも証明された。
以上のデータを論文にまとめ、Stem Cell Reports誌に投稿し、掲載された（Nishimura K et al. 2014）。また、論文の内容について大学のHPでプレスリリースを行い、それに関する記事が、2014年10月3日付けの日本経済新聞に掲載された。
また、paused iPSCにおいて、Klf4に対するChIP-seq解析を行うために、Flag-tag付きKlf4を発現するpaused iPS細胞誘導用ベクター（SeVdp(fKgOSM)）を作製した。このベクターを用いて、Klf4発現量を調節しながらiPS細胞を誘導したところ、SeVdp(fKOSM)を用いた時と同様に、Klf4発現量依存的に多能性が異なるpaused iPSCが得られたことから、Flag-tagはpaused iPSC誘導には影響しないことを明らかにした。そして、paused iPSCからクロマチンを調整し、抗Flag抗体を用いてクロマチン免疫沈降を行う方法を確立した。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
研究成果を論文発表することができ、新聞に記事が掲載されたので、その点では進展したと言える。また、ChIP-seq解析のための準備として、新たなベクターも作製し終えた。
しかし、予算が足りないためにChIP-seqの解析委託をすることが出来なかったため、やや遅れているとした。
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| Strategy for Future Research Activity |
今年度はまず、昨年度用意したベクターを用いてChIP-seq解析を行い、その結果を元に、Klf4発現量依存的な多能性獲得機構を明らかにすることを試みる。また、その知見を活かして、高い多能性を獲得したiPS細胞をより効率良く誘導する方法の確立する。
さらに、同様の方法でヒトpaused iPSCの誘導も試みて、ヒトiPS細胞誘導におけるKlf4発現量依存的な多能性獲得機構についても解析を試みる。
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| Remarks |
Stem Cell Reports誌に掲載された論文の内容について、大学のホームページにプレスリリースしたもの。
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[Journal Article] Prediction of inter-individual differences in hepatic functions and drug sensitivity by using human iPS-derived hepatocytes.2014
Author(s)
K. Takayama, Y. Morisaki, S. Kuno, Y. Nagamoto, K. Harada, N. Furukawa, M. Ohtaka, K. Nishimura, K. Imagawa, F. Sakurai, M. Tachibana, R. Sumazaki, E. Noguchi, M. Nakanishi, K. Hirata, K. Kawabata, H. Mizuguchi
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Journal Title
Proc. Natl. Acad. Sci. USA
Volume: 111
Pages: 16772-16777
DOI
Peer Reviewed
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