2016 Fiscal Year Annual Research Report
Genetic humanized Mouse production by CRISPITT
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26870077
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| Research Institution | University of Tsukuba |
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Principal Investigator |
水野 聖哉 筑波大学, 医学医療系, 助教 (10633141)
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| Project Period (FY) |
2014-04-01 – 2017-03-31
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| Keywords | 受精卵ゲノム編集 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
昨年度までの研究から目的とするNOGマウスの親系統であるNOD系統ではゲノムの改変が難しいことが判明していた。そこで、系統における受精卵ゲノム編集効率を解析するために、C57BL/6J系統をコントロールとして、BALB/c系統・ICR系統・C3H・NOD系統系統を用いて実験行った。
C57BL/6J系統では目的部位切除型のノックアウト効率が平均で約31%、またノックイン効率が8%程度であることが判明した。BALB/c系統ではノックアウトもノックイン効率もC57BL/6系統とほとんど差がなかったが、排卵誘導効率が低いために遺伝子を導入する受精卵を取得するためには多数の動物を準備しなくてはいけないことが明らかとなった。これに対し、ICR系統は排卵効率がよいものの遺伝子編集効率がC57BL/6系統に比べ、三分の一程度であった。C3H系統は、排卵誘導効率も受精卵からの個体復元効率も問題なかった。更に目的部位切除型のノックアウト変異誘導効率が70%を超えるなど、受精卵ゲノム編集に適している系統でることを明らかにした。最後にNODマウスであるが、DNA導入後に約半数の胚で発生停止が観察された。個体復元効率に異常はなかったが、ノックイン・ノックアウトともにゲノム編集効率は著しく低かった。
また、標準系統であるC57BL/6においては、ヒト遺伝子ノックインのみならず点変異の誘導やメガベース単位の欠失の誘導更には7000塩基対をこえるノックインも成功させ、受精卵ゲノム編集が十分実用化に耐えうることが明らかとなった。いくつかの系統ではいまだに狙い通りの編集が起きにくいために、胚の培養液や遺伝子導入のタイミングを詳細に検討する必要があると考えられた。
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[Journal Article] SHISA6 Confers Resistance to Differentiation-Promoting Wnt/β-Catenin Signaling in Mouse Spermatogenic Stem Cells2017
Author(s)
Moe Tokue, Kanako Ikami, Seiya Mizuno, Chiyo Takagi, Asuka Miyagi14, Ritsuko Takada, Chiyo Noda, Yu Kitadate, Kenshiro Hara, Hiroko Mizuguchi, Takuya Sato, Makoto Mark Taketo, Fumihiro Sugiyama, Takehiko Ogawa, Satoru Kobayashi, Naoto Ueno, Satoru Takahashi, Shinji Takada, Shosei Yoshida
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Journal Title
Stem Cell Reports
Volume: 8
Pages: 561-575
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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[Journal Article] Forward genetic analysis of sleep in randomly mutagenized mice.2017
Author(s)
Hiromasa Funato, Chika Miyoshi, Tomoyuki Fujiyama, Takeshi Kanda, Makito Sato, Zhiqiang Wang, Jing Ma, Shin Nakane, Jun Tomita, Aya Ikkyu, Miyo Kakizaki, Noriko Hotta-Hirashima, Satomi Kanno, Haruna Komiya, Fuyuki Asano, Takato Honda, Staci J. Kim, Kanako Harano, Hiroki Muramoto, Toshiya Yonezawa, Seiya Mizuno, et. al.
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Journal Title
Nature
Volume: 539
Pages: 378-383
DOI
Peer Reviewed / Int'l Joint Research
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[Journal Article] Generation of CRISPR/Cas9-mediated bicistronic knock-in ins1-cre driver mice.2016
Author(s)
Yoshikazu Hasegawa, Yoshikazu Hoshino, Abdelaziz E. Ibrahim, Kanako Kato, Yoko Daitoku, Yoko Tanimoto, Yoshihisa Ikeda, Hisashi Oishi, Satoru Takahashi, Atsushi Yoshiki, Ken-ichi Yagami, Hiroyoshi Iseki, Seiya Mizuno, Fumihiro Sugiyama
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Journal Title
Experimental Animals
Volume: 65
Pages: 319-327
DOI
Peer Reviewed
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