イムノバインド法によるマイコプラズマの抗体検出および簡易同定の研究

1988 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 62560310
• Research Institution: Miyazaki University, Faculty of Agriculture.
• Principal Investigator: 清水 高正 宮崎大学, 農学部, 教授 (10040825)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 永友 寛司 宮崎大学, 農学部, 助教授 (10041063)
• Keywords: ドット・イムノバインド法 / 血清学的診断法 / マイコプラズマ・ガリセプチクム

Research Abstract

1.前年度に比較した2種の膜にNitroplus2000を加え、種々の条件下でDIBを実施した結果、やはりDurapore膜が染色性及び弾力性の点で最も適することが判明した。
2.新しくM.synoviae(MS)抗原を作成、M.gallisepticum(MG)に実験感染させたSDF鶏の血中抗体の推移を調べた結果、感染鶏の血中には1週後からDIB抗体が出現し、HI抗体と共に11週間の実験期間中高いDIB抗体価を保持した。陰性対照鶏は1:10〜1:20程度の弱い抗体価で推移した。MS抗原に対しては両群とも低い抗体価を呈したまま推移した。これらの成績から、1:80以上の抗体価を陽性と判定すれば、DIB抗体価はマイコプラズマ感染抗体を特異的に検出できる一新法となることが証明できた。
3.野外で凝集反応により、MGとMSに感染していることが推定された1農場の採卵鶏112羽の血清を用い、MG・MS両抗原によるHI反応とDIB反応を実施した。その結果、HI抗体陽性鶏のDIB抗体価は、両抗原とも1:80ないし1:≧640の高い値を示したのに対しHI陰性血清のDIB力価はおおむね1:20以下で、少数は1:40を示したが、それらのdotの呈色は微弱であった。
4.上記の112例の血清を予め100倍に定点希釈し、これにMGとMSの両抗原を固定させた膜片を浸漬する手技でDIBを実施した結果、MG抗原に対してはDIB価80倍以上の血清はすべて陽性、40倍以下はすべて陰性で、一致率は100%であった。MS抗原についてはDIB価80倍の17例中2例が定点希釈法で陰性を示した以外は、すべてがよく一致した。この方法は野外でMG・MSの感染診断を行う際に、より実用的な手技となることが示唆された。

Research Products

• [Publications] SHIMIZU,Takamusa.;Nagatomo,Hiroshi.: Zentralblatt fur Bakteriologie und Hygiene,A.
• [Publications] SHIMIZU,Takamusa.;TAKAHATA,Toshihiro.;KATO,Masahiro.: Japanese J.of Veterinary Sciences.