牛初乳インスリン様成長因子の抽出法開発および家畜生産研究への応用

1990 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 63860036
• Research Institution: Tohoku University
• Principal Investigator: 佐々木 康之 東北大学, 農学部, 教授 (90005637)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 梅津 元昭 東北大学, 農学部, 助手 (30005649) ; 庄司 芳男 東北大学, 農学部, 助手 (60005642) ; 加藤 和雄 東北大学, 農学部, 助教授 (60091831) ; 太田 実 東北大学, 附属農場, 助教授 (00005670)
• Keywords: 牛初乳 / インスリン様成長因子 / 生物活性

Research Abstract

1.牛初乳IGFーIの抽出精製
初乳からアセトンパウダ-調製に至る操作について、前年度までに検討した過程を簡便化した。すなわち、37℃保温初乳にキモシン(0.1mg/ml)を添加して生成させた凝固カ-ドを細切し、冷却遠沈してホエ-を得た。これにより脱脂およびホエ-調製を同時に行うことができた。次いで、ホエ-1容に酸エタノ-ル混合液4容を加え、撹拌し、室温30分静置後遠沈して得た上清に冷アセトン3容を加えてアセトンパウダ-をとり、これを水に容解後、凍結乾燥し、以後のカラムクロマトグラフィ-に供した。この過程は前年度までと同様である。次いで、アセトンパウダ-をセファデックスG50に供し、1M酢酸で溶出してIGFーI活性の認められた分画番号23〜30(MW7,000付近)を凍結乾燥して、更にTSKG3000にてゲル濾過を行った。TSKG3000に、アセトンパウダ-を直接に供した前年度までの操作の中間に、セファデックス処理を導入することにより精製効率は向上した。TSKG3000溶出液のIGFーI活性画分を、ODPー50アセトニトリル(20ー50ー80%・TFA0.05%)の逆相クロマトグラフィ-により更に2回精製した。精製各段階におけるIGFーI免疫活性(比活性ngIGFーI/mgタンパク)は、アセトンパウダ-,43;セファデックスG50,731;TSKG3000,1,643;第1回ODP50,32,220であり、この段階では約3%の含量であった。第2回ODP以後の精製を更に進める必要がある。
2.牛初乳IGFーIの生物活性検定
L6筋芽継代培養細胞を用いて、精製段階でのIGFーI生物活性を定性的に検討した。アセトンパウダ-の生物活性は低かったが、ゲル濾過標品では、紡錘型L6細胞が多角化して突起を伸ばしたことから、この過程で生物活性は失われず、生物活性の精製度は明らかに上昇した。

Research Products

• [Publications] S.Oda: "Insulin like growth factorーI,GH,insulin and glucagon concentrations in bovine colostrum and in plasma of dairy cows and neonatal calves around parturition" Comp.Biochem.Physiol.(A). 94. 805-808 (1989)
• [Publications] S.Oda: "Periparturient changes in concentration of insulin like growth factorーI in bovine colostrum and in plasma of dairy cows and neonatal calves" AsianーAustralasian J.Anim.Sci.2. 210-211 (1989)
• [Publications] 小田 伸一: "ウシの分娩に伴う初乳及び血漿インスリン様成長因子ーI、成長ホルモン、インスリン、グルカゴン濃度変動について" 川渡農場報告. 5. 63-66 (1989)
• [Publications] 小田 伸一: "ウシの分娩に伴う血漿および初乳IGFーI、GH、インスリン、グルカゴン濃度変動について" 第80回日本畜産学会大学講演要旨. 185 (1988)
• [Publications] 小田 伸一: "ウシ初乳インスリン様成長因子ーIの調製について" 第84回日本畜産学会大会・大会要旨. (1991)