AT2受容体に特異的な血管分化,リモデリング関連分子,転写調節因子の同定と機能解析
Project/Area Number |
02F00533
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Research Category |
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
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Allocation Type | Single-year Grants |
Section | 外国 |
Research Field |
Circulatory organs internal medicine
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Research Institution | Ehime University |
Principal Investigator |
堀内 正嗣 愛媛大学, 医学部, 教授
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Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
WU Lan 愛媛大学, 医学部, 外国人特別研究員
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Project Period (FY) |
2002 – 2003
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Project Status |
Completed (Fiscal Year 2003)
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Budget Amount *help |
¥1,800,000 (Direct Cost: ¥1,800,000)
Fiscal Year 2003: ¥900,000 (Direct Cost: ¥900,000)
Fiscal Year 2002: ¥900,000 (Direct Cost: ¥900,000)
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Keywords | アンジオテンシンII / 受容体 / 血管平滑筋 / 細胞増殖 / 血管リモデリング / 転写調節因子 / 遺伝子発現 / プロモーター / 血管分化 / 血管平滑筋細胞 / 血管内皮細胞 |
Research Abstract |
本年度は、AT2受容体の細胞内作用機構について探求するため実施計画に基づき以下に述べる実験を行い新たな研究成果を得た。 まずMCP-1発現調節におけるAT2受容体の作用機構をラット大動脈より分離した培養血管平滑筋細胞を用いて検討した。胎生期の血管平滑筋にはAT1受容体に加えてAT2受容体が発現している。この培養細胞をアンジオテンシンIIで刺激するとNorthern blotにてMCP-1mRNA量が濃度依存性に増加し、Gel mobility shift assayによる検討でNF-κBのMCP-1のプロモーター領域への結合が促進した。また、アンジオテンシンIIはNF-κBの阻害因子である細胞内IκB含量を低下させた。アンジオテンシシIIの作用はAT1受容体ブロッカーにより抑制されAT2受容体ブロッカーにより増強した。さらに、SHP-1変異遺伝子のtransfectionはAT2受容体刺激によるMCP-1遺伝子発現調節とそのシグナル伝達因子を抑制することが判明した。これらの結果から、AT1受容体刺激とAT2受容体刺激は血管平滑筋細胞からのMCP-1遺伝子発現に対して、転写調節因子レベルで拮抗的に調節作用を有することが示唆される。また、AT2受容体遺伝子の発現調節機構を検討するため、胎生期および新生児期の血管平滑筋細胞を分離培養するとAT2受容体結合能は16日より増加し、胎生20日にピークとなり、新生児期以降は激減した。AT2受容体遺伝子の発現調節を調べるため、AT2受容体遺伝子のプロモーター領域をさまざまな範囲にわたって欠如した変異DNAを作成し、レポーター遺伝子(ルシフェラーゼ)を結合させた後、平滑筋細胞にtransferして遺伝子発現を検討すると、胎生20日目の平滑筋細胞において-755/-334の領域を欠如した変異プロモーターでAT2受容体の発現が著しく低下したことから、この領域がAT2受容体の発現調節に需要であると考えられた。さらに、ラットのバルーン血管傷害モデルの大動脈から分離培養した血管平滑筋細胞を用いて同様の実験を行うと、AT1受容体結合能は傷害後にも変化しなかったが、AT2受容体結合能は傷害7日目に増加した。この細胞では、-755/-334の領域を欠如した変異プロモーターによってもAT2受容体遺伝子発現は抑制されなかった。この結果は、傷害血管におけるAT2受容体の再発現調節は、胎生期における同受容体の発現調節とはメカニズムが異なると推測される。
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Report
(2 results)
Research Products
(5 results)
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[Publications] Wu, L., Iwai, M., Li, Z., Shiuchi, T., Min, L-J., Cui, T-X., Horiuchi, M., et al.: "Regulation of IkB and MCP-1 by angiotensin type2 receptor-activated SHP-1 in fetal vascular smooth muscle cells."Mol Endocrinology. in press. (2004)
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[Publications] Li, J-M., Cui, T-X., Shiuchi, T., Liu, H-W., Min, L-J., Wu, L., Horiuchi, M., et al.: "Nicotine enhances angiotensinII-induced mitogenic response in vascular smooth muscle cells and fibroblasts."Arterio Thromb Vasc Biol. 24. 80-84 (2004)
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[Publications] Min, L-J., Cui, T-X., Yahata, Y., Yamasaki, K., Wu, L., Horiuchi, M., et al.: "Regulation of collagen synthesis in mouse skin fibroblasts by distinct angiotensin II receptor subtypes."Endocrinology. 145. 253-260 (2004)
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[Publications] Chen, R., Iwai, M., Wu, L., Suzuki, J., Min, L-J., Horiuchi, M., et al.: "Important role of nitric oxide in the effect of angiotensin-converting enzyme inhibitor imidapril on vascular injury."Hypertension. 42. 542-547 (2003)
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[Publications] Li, Z., Iwai, M., Wu, L., Shiuchi, T., Jinno, T., Cui, T-X., Horiuchi, M., et al.: "Role of AT2 receptor in the brain in regulation of blood pressure and water intake."Am J Physiol. 284. 116-121 (2003)