インビトロ再構成系を用いたγセクレターゼによる蛋白質切断機構に関する研究

• Project/Area Number: 04J11727
• Research Category: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• Allocation Type: Single-year Grants
• Section: 国内
• Research Field: Biological pharmacy
• Research Institution: The University of Tokyo
• Principal Investigator: 林 幾雄 東京大学, 大学院薬学系研究科, 特別研究員(DC1)
• Project Period (FY): 2004 – 2006
• Project Status: Completed (Fiscal Year 2006)
• Budget Amount: ¥2,800,000 (Direct Cost: ¥2,800,000); Fiscal Year 2006: ¥900,000 (Direct Cost: ¥900,000); Fiscal Year 2005: ¥900,000 (Direct Cost: ¥900,000); Fiscal Year 2004: ¥1,000,000 (Direct Cost: ¥1,000,000)
• Keywords: アルツハイマー病 / γセクレターゼ / バキュロウイルス / 膜蛋白質切断 / モノクローナル抗体 / 単粒子解析

Research Abstract

アルツハイマー病(AD)患者脳内に蓄積する老人斑の主成分は、アミロイドβ蛋白質(Aβ)である。AβはAD発症に深く関わるとされ、その産生を担うγセクレターゼの切断機構の解明は、ADの病因解明、治療・予防薬の開発にあたって極めて重要である。近年FAD病因遺伝子産物であるpresenilinを中心としたnicastrin(NCT)、APH-1、PEN-2を含む高分子量膜蛋白質複合体がγセクレターゼの本体であるとする結果が集積しつつある。NCTはγ-secretase複合体を構成する膜蛋白質の一つであり、基質の受容体として機能することが知られている。
本年度の研究では、Sf9-baculovirus発現系において発芽型ウイルス粒子(BV)上に機能型膜蛋白質が集積することに注目し、γ-secretase活性をmodulateする機能抗体の作製を目的として、NCTを発現させたBVを免疫原として抗NCTモノクローナル抗体を作製した。
その結果、免疫染色、免疫沈降、ウェスタンブロットにおいて機能型NCTを認識する抗体A5226Aが得ることに成功した。また、、A5226はin vitro γ-secretase活性を有意に阻害し、γ-secretase活性依存的な癌細胞の増殖を抑制することを見出した。これらの結果から、A5226AはNCTを標的としたADおよび癌の抗体治療薬として有効と考えられる。

Research Products

• [Journal Article] Selective reconstitution and recovery of functional γ-secretase complex on budded baculovirus particles (2004)
  • Author(s): Ikuo Hayashi
  • Journal Title: Journal of Biological Chemistry 279・36 Pages: 38040-38040
• [Journal Article] Three-dimensional structure of the γ-secretase complex
  • Author(s): Toshihiko Ogura
  • Journal Title: Biochemical and Biophysical Research Communications (in press)
• [Patent(Industrial Property Rights)] アルツハイマー病および癌の治療薬 (2006)
  • Inventor(s): 岩坪威
  • Industrial Property Rights Holder: 岩坪威
  • Industrial Property Number: 2006-199489
  • Filing Date: 2006-04-25