がん関連糖鎖抗原に対する単鎖抗体の作製とその診断への応用
Project/Area Number |
08J40063
|
Research Category |
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
|
Allocation Type | Single-year Grants |
Section | 国内 |
Research Field |
Functional biochemistry
|
Research Institution | Tokai University |
Principal Investigator |
高崎 綾乃 東海大学, 工学部, 特別研究員(RPD)
|
Project Period (FY) |
2008 – 2010
|
Project Status |
Completed (Fiscal Year 2010)
|
Budget Amount *help |
¥2,600,000 (Direct Cost: ¥2,600,000)
Fiscal Year 2010: ¥1,000,000 (Direct Cost: ¥1,000,000)
Fiscal Year 2009: ¥800,000 (Direct Cost: ¥800,000)
Fiscal Year 2008: ¥800,000 (Direct Cost: ¥800,000)
|
Keywords | 大腸菌発現系 / 封入体 / 単鎖抗体 / 糖鎖結合性 / 糖鎖親和性 / リフォールディング / ファージライブラリー / T抗原 / マンノトリオース / がん関連糖鎖抗原 / Tn抗原 / ファージ抗体 / パニング / SPR解析装置 / シアリルT抗原 |
Research Abstract |
〈内容〉本研究では、ファージディスプレイ法により取得したがん関連糖鎖構造を標的とした単鎖抗体の調製とその診断や治療への応用を目的とした。標的とした糖鎖構造は、T抗原糖鎖構造および、マンノトリオース構造である。申請者は、大腸菌発現系で不溶性となった単鎖抗体を封入体として大量に得て、これを可溶化し精製後、ステップワイズ透析法にてリフォールディングを行うことで可溶性単鎖抗体を得た。さらにSPR法などにより単鎖抗体の結合親和性を調べた。また、これら単鎖抗体の、乳がん細胞のFoci形成能への阻害効果を調べた。さらに単鎖抗体の糖鎖付加による安定化を目的として、ショウジョウバエ細胞を用いた単鎖抗体発現系の構築を行った。一方、がん関連糖鎖抗原であるTn抗原が2糖あるいは3糖並んだ構造を認識するマウスモノクローナルMLS128抗体について熱力学的解析を行い、糖鎖と抗体との相互作用メカニズムについて詳細な情報を得た。 〈意義〉糖鎖は自己抗原であるため、それらに対する抗体は生体内では得られにくく、また、動物細胞ではその発現株の樹立が困難であることが判明している。本研究では大腸菌発現系を用いて、リフォールディングにより可溶性単鎖抗体を得ることとし、大量調製を目指した。一方、単鎖抗体の溶液中での可溶化および安定化を高めることを目的としてショウジョウバエ細胞発現系を選択しその調製を試みた。また、糖鎖に対する抗体を得るにあたり、抗体と糖鎖の相互作用メカニズムを知るのは非常に重要であると考えられたことから、MLS128抗体とTn抗原との相互作用についてSPR法、ITC法などにより熱力学的解析を行った。 〈重要性〉標的となる糖鎖構造は両者ともに種々のがん細胞で高発現することが明らかにされており、がんの分子標的療法への応用が切望される。
|
Report
(3 results)
Research Products
(19 results)
-
-
-
[Journal Article] Production of anti-carbohydrate antibodies by phage-display technologies : Potential impairment of cell growth as a result of endogenous expression.2010
Author(s)
Yuasa, N., Zhang, W., Goto, T., Sakaue, H., Matsumoto-Takasaki, A., Kimura, M., Ohshima, H., Tsuchida, Y., Koizumi, T., Sakai, K., Kojima, T., Yamamoto, K., Nakata, M., Fujita-Yamaguchi, Y.
-
Journal Title
J Biol. Chem.
Volume: 285
Pages: 30587-30597
Related Report
Peer Reviewed
-
-
-
-
-
-
[Presentation] Assessing the Roles of N-and O-Glycoproteins on Focus Formation in Breast Cancer MCF-7 Cells Using Anti-Carbohydrate Antibodies.2010
Author(s)
Matsumoto-Takasaki, A., Yuasa, N, Katagiri, D., Yamazaki, S., Nakata, M., Phung, S., Chen, S., Fujita-Yamaguchi, Y.
Organizer
The 28^<th> NAITO CONFERENCE ON Glycan Expression and Regulation [1] Function and Disease Mechanisms
Place of Presentation
湘南国際村センター(神奈川)
Related Report
-
[Presentation] Effects of anti-carbohydrate antibodies on focus formation.2010
Author(s)
Matsumoto-Takasaki, A., Yuasa, N, Katagiri D., Yamazaki, S., Nakata, M., Phung, S., Chen, S., Nakada, H., Fujita-Yamaguchi, Y.
Organizer
The 25^<th> International Carbohydrate Symposium
Place of Presentation
Tokyo, Japan
Related Report
-
[Presentation] In vitro production of anti-carbohydrate antibodies : Purification of anti-T-antigen (beta Gall-3GalNAc-Thr/Ser) single chain antibodies (scFvs) from inclusion bodies.2010
Author(s)
Matsumoto-Takasaki, A., Yamaguchi, S., Koizumi, T., Yuasa, N., Fujita-Yatnaguchi, Y.
Organizer
240^<th> American Chemical Society National Meeting and Exposition
Place of Presentation
Boston, MA, USA
Related Report
-
[Presentation] Analyses of anti Tn-antigen MLS128 monoclonal antibody binding to two or three consecutive Tn-antigen clusters by surface plasmon resonance (SPR) and NMR2010
Author(s)
Matsumoto-Takasaki, A., Aoki, A., Hanashima, S., Yamaguchi, Y., Sato, R., Kawakami, H., Mizuno, M., Nakata., M., Nakada., H., Fujita-Yamaguchi, Y.
Organizer
240^<th> American Chemical Society National Meeting and Exposition
Place of Presentation
Boston, MA, USA
Related Report
-
[Presentation] Refolding and characterization of three anti-mannotriose single chain antibodies2010
Author(s)
Katagiri, D., Matsumoto-Takasaki, A., Yuasa, N., Koyama, T., Ogawa, H., Sakai, K., Takayanagi, A., Nakata, M., Fujita-Yamaguchi, Y.
Organizer
BMB2010 (日本生化学会・分子生物学会)
Place of Presentation
神戸ポートアイランド(兵庫県)
Related Report
-
-
-
-
-
-