薬剤性肝障害の進展機序の解明；特に，起炎因子が免疫細胞の発現と機能に与える影響

Research Project

Project/Area Number	18J14823
Research Category	Grant-in-Aid for JSPS Fellows
Allocation Type	Single-year Grants
Section	国内
Research Field	Veterinary medical science
Research Institution	Osaka Prefecture University
Research Fellow	倉持瑞樹大阪府立大学, 生命環境科学研究科, 特別研究員(DC2)
Project Period (FY)	2018-04-25 – 2020-03-31
Project Status	Completed (Fiscal Year 2019)
Budget Amount *help	¥1,900,000 (Direct Cost: ¥1,900,000) Fiscal Year 2019: ¥900,000 (Direct Cost: ¥900,000) Fiscal Year 2018: ¥1,000,000 (Direct Cost: ¥1,000,000)
Keywords	肝細胞傷害 / HMGB1 / 炎症性シグナル / 糖終末代謝物受容体（RAGE） / 自然免疫 / ラット / Toll様受容体
Outline of Annual Research Achievements	炎症の起点として，傷害・壊死細胞から放出されるDamage-Associated Molecular Patterns（DAMPs）の関与が注目されている．代表的なものにHigh mobility group boxes（HMGBs）があり，HMGB1はToll-like receptor 4（TLR4）や糖終末代謝物受容体（RAGE）を受容体とするとの報告がある．しかし，HMGB1の起炎因子としての役割については不明な点が多い．本研究では，薬剤誘発性肝細胞傷害におけるHMGB1と，炎症細胞の特徴について解析を行った．肝細胞傷害を起こす薬剤としてチオアセトアミドを選択し，チオアセトアミド単独投与群と，チオアセトアミド投与後にHMGB1中和抗体を投与した群の肝組織を用いて，病理組織学的評価，リアルタイムPCR法による炎症性サイトカインを解析した．病理組織学的に，チオアセトアミド投与後12時間から軽度の肝細胞壊死とマクロファージと好中球の浸潤がみられ，免疫組織化学での陽性細胞数はHMGB1中和群で有意に少なかった．さらに，投与後24時間で肝逸脱酵素値はHMGB1中和群で有意に低値を示した．リアルタイムPCR法では，炎症性サイトカイン（IL-6）とマクロファージ遊走因子（MCP-1）がHMGB1中和群で有意に低かった．さらに，蛍光免疫染色でTAA投与後6時間でHMGB1の核から細胞質への移行を認めた．ウエスタンブロット法でTLR4のシグナル分子やMAPキナーゼの発現量が両群で有意差が認められなかったことから，さらに上流の分子に注目したところ，RAGEの特異的分子であるDia-1の発現が中和抗体投与群で低下していた．以上の事から，化学物質による肝細胞の傷害に応じて放出されたHMGB1が，RAGEを介して炎症を進展させ，好中球の動員やマクロファージの活性化に関与していると考えられる．
Research Progress Status	令和元年度が最終年度であるため、記入しない。
Strategy for Future Research Activity	令和元年度が最終年度であるため、記入しない。