血管異常収縮の原因分子であるスフィンゴ脂質の産生経路の解明
| Project/Area Number |
21890166
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
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| Allocation Type | Single-year Grants |
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| Research Field |
General physiology
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| Research Institution | Yamaguchi University |
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Principal Investigator |
高田 雄一 Yamaguchi University, 医学(系)研究科(研究院), 研究員 (00549016)
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| Project Period (FY) |
2009 – 2010
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| Project Status |
Completed (Fiscal Year 2010)
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| Budget Amount *help |
¥2,535,000 (Direct Cost: ¥1,950,000、Indirect Cost: ¥585,000)
Fiscal Year 2010: ¥1,209,000 (Direct Cost: ¥930,000、Indirect Cost: ¥279,000)
Fiscal Year 2009: ¥1,326,000 (Direct Cost: ¥1,020,000、Indirect Cost: ¥306,000)
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| Keywords | スフィンゴ脂質 / 活性酸素 / マクロファージ / 血管異常収縮 |
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| Research Abstract |
本年度は、血管異常収縮の原因分子であるスフィンゴシルホスホリルコリン(SPC)が、活性酸素(その中でも特にOHラジカル)依存的にスフィンゴミエリンから産生されることを、分子レベルおよび細胞レベルで証明するため、それぞれ検討をおこない、以下の研究成果を得た。
1) 分子レベル:酵素を含まない溶液中で、OHラジカルとSPCが実際に産生されることを直接証明するため、OHラジカルについては、スピントラップ剤(DMPO)を用いた電子スピン共鳴測定法により定量化し、また、SPC産生については、SPC安定同位体元素標識体(SPC-d3)を内部標準物質としたLC-MS/MS(MRMモード)測定法を用いて検討した。結果としては、鉄イオンと過酸化水素を含む酸性溶液中でOHラジカルが産生され、さらに、そのOHラジカル産生条件下において、SPCが著明に産生されることが判明した。
2) 細胞レベル:本研究では、SPC産生メカニズムの基盤として、酸性環境かつ過酸化水素が豊富な、マクロファージのライソゾーム中における赤血球消化を想定している。そこで、ボルボールエステル(PMA)刺激により、ヒト単球系細胞株であるTHP-1をマクロファージ様細胞に分化させた後、赤血球を貧食させ、経時的にSPC産生量を測定した。現在、予備的実験段階ではあるが、赤血球添加12時間後以降において、確かにSPC産生量が増加していることが証明された。さらに、鉄イオンを含まない赤血球ゴーストを用いて同様の実験を行った場合には、SPC産生量は増加しないことが判明した。以上により、SPC産生経路として想定した仮説が、分子レベルでも細胞レベルでも、正しいことが証明された。
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Report
(1 results)
Research Products
(3 results)
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[Presentation] Purification and focused proteomic analysis of lipid rafts which mediate human vascular smooth muscle(vsm) Ca^<2+> -sensitization2009
Author(s)
C.Wang, H.Kishi, A.Torikai, Y.Maeda, H.Kawamichi, K.Kajiya, Y.Takada, D.Tokumori, M.Nakashima, S.
Organizer
The American Society for Cell Biology 49th Annual Meeting
Place of Presentation
San Diego, CA
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