研究課題/領域番号 |
03J50631
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研究種目 |
特別研究員奨励費
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配分区分 | 補助金 |
応募区分 | 国内 |
研究分野 |
生物系薬学
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研究機関 | 大阪大学 |
研究代表者 |
田中 亜紀 大阪大学, 大学院・薬学研究科, 特別研究員(DC1)
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研究期間 (年度) |
2003 – 2005
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研究課題ステータス |
完了 (2005年度)
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配分額 *注記 |
2,600千円 (直接経費: 2,600千円)
2005年度: 900千円 (直接経費: 900千円)
2004年度: 900千円 (直接経費: 900千円)
2003年度: 800千円 (直接経費: 800千円)
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キーワード | 転写制御 / TFIIE / TFIIH / 基本転写因子 / Znフィンガー領域 / 転写開始 / 転写伸長への移行 / winged helix領域 |
研究概要 |
TFIIEの機能解析 TFIIEαのN末側は転写に必要な領域であり、ヒトTFIIEαの1〜105番目のアミノ酸領域はwinged helix領域であることが明らかになった。この領域はβサブユニットも有している構造モチーフでタンパク質間相互作用、DNA結合に関わる。この領域の点変異体を作成しin vitro転写再構成系で転写活性の測定を行ったところ、25番目のフェニルアラニンと26番目のチロシンはTFIIEβサブユニットとの結合に必要なアミノ酸である可能性が示唆された。またwinged helix因子の中で、TFIIEαサブユニットに特徴的な長いウイングが転写開始から伸長への移行に機能する可能性が示唆された。 TFIIEと相互作用する因子の検索 タグを付けたTFIIEαサブユニットを発現するHeLa細胞から調製した核抽出液から、タグに対する抗体カラムでTFIIEと相互作用する因子を単離した。TFIIEβサブユニットはαサブユニットと同程度の比率で精製されており、さらにいくつかの因子を含んでいた。これらの因子をMaldi-TOFマススペクトルで同定を試みたが、量的に同定できなかった。TFIIEαは細胞内で厳密に制御されているようで、過剰に発現すると細胞が生存できない。そのためマススペクトルのサンプル量を確保することは難しく、新たにタグを付けたTFIIEβを発現するHeLa細胞株を樹立し、核抽出液を調整している。
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