| 研究課題/領域番号 |
04671493
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| 研究種目 |
一般研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究分野 |
内分泌・代謝学
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| 研究機関 | 宮崎医科大学 |
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研究代表者 |
小谷 富男 宮崎医科大学, 医学部, 助教授 (10161936)
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| 研究期間 (年度) |
1992 – 1993
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| 研究課題ステータス |
完了 (1993年度)
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| 配分額 *注記 |
2,000千円 (直接経費: 2,000千円)
1993年度: 700千円 (直接経費: 700千円)
1992年度: 1,300千円 (直接経費: 1,300千円)
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| キーワード | ヨードポンプ / クローニング / CDNAクローニング |
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| 研究概要 |
平成4年度Na^+/I^--symporterのexpression cloningを目的にFRTL-5から抽出したmRNAを用いてcDNAを作製し、これを発現vector pCDM8に挿入。500〜2,000個の大腸菌コロニーからなるプールからplasmidを抽出しCos7細胞にデキストラン法によりtransfection、Cos7の^<125>Iの取り込みを測定することによりNa^+/I^--symporterのcDNAクローニングを試みた。しかし、上記スクリーニングシステムではsymporterをクローニング出来ず、プラスミッドをtransfectionしたCos7に^<125>Iを取り込ませるというシステムそのものに問題がありsymporterをうまく発現出来ないと結論した。
平成5年度は前年度の反省からVilijn等が行ったFRTL-5のmRNAをXenopus oocyteに注入し^<125>Iを取り込ませるシステムにより、Na^+/I^--symporterのクローニングを試みることにした。大腸菌コロニーのプールからプラスミッドを抽出した後、in vitroでmRNAを合成し、このmRNAをoocyteに注入する方法である。マイクロインジェクションの設備及び経験が無かったため、設備を整えoocyteを調整しマイクロインジェクションに慣れるのに時間がかかり、現在のところ結果を出すに至っていない。
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