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チミンダイマー認識抗体によるDNAの光損傷修復

研究課題

研究課題/領域番号 05404073
研究種目

一般研究(A)

配分区分補助金
研究分野 医薬分子機能学
研究機関北海道大学

研究代表者

大塚 栄子  北海道大学, 薬学部, 教授 (80028836)

研究分担者 二階堂 修  金沢大学, 薬学部, 教授 (60019669)
森岡 弘志  北海道大学, 薬学部, 助手 (20230097)
岩井 成憲  北海道大学, 薬学部, 助手 (10168544)
井上 英夫  北海道大学, 薬学部, 助教授 (80088856)
研究期間 (年度) 1993 – 1994
研究課題ステータス 完了 (1994年度)
配分額 *注記
25,200千円 (直接経費: 25,200千円)
1994年度: 3,900千円 (直接経費: 3,900千円)
1993年度: 21,300千円 (直接経費: 21,300千円)
キーワード紫外線損傷DNA / チミンダイマー / PCRクローニング / シングル鎖抗体 / フレキシブルリンカー
研究概要

1)チミン2量体(チミンダイマー)を含むDNA断片の合成
適当な保護機を導入したチミジン2量体に紫外線照射を行った後,3'-ホスホアミダイト体とすることによりチミンダイマーを含んだ結合ユニットとした.チミンダイマーを含んだオリゴヌクレオチド(dGCGGTTGGCG)をこの結合ユニットを用いてDNA合成機により大量合成した.
2)チミンダイマーおよびピリミジン(6-4)光産物認識抗体の可変領域(F_V)遺伝子のクローニングと発現ベクターの構築
マウス抗体F_V遺伝子配列のデータベースをもとにして、可変領域H鎖(V_H)及び(V_L)遺伝子のそれぞれの5'側および3'側にプライマーを設計した。紫外線損傷DNA認識抗体を産生するハイブリドーマ細胞から,PCR法によってV_HおよびV_L遺伝子をクローニングし,塩基配列を決定した。
V_HおよびV_L両遺伝子を(Gly_4-Ser)_3というアミノ酸配列を持つフレキシブルリンカー部分の遺伝子(鎖長52merの2本のオリゴヌクレオチドをハイブリダイズさせたもの)を介して,T4DNAリガーゼにより結合させ,scFv遺伝子を得た。
3)scFv遺伝子の大腸菌内での発現とscFvの精製
scFv遺伝子をT7ファージRNAポリメラーゼのプロモーターを持つ発現ベクターに組み込み,大腸菌中で発現させ,scFvの精製を行いSDSゲルクロマトグラフィーで単一バンドを示すscFvを得た。
4)scFvと損傷DNAとの結合
上記のscFvのうちピロミジン(6-4)光産物認識抗体は本損傷を含むDNA断片と結合し,シクロブタンダイマーとは結合しないことを確かめた。

報告書

(3件)
  • 1994 実績報告書   研究成果報告書概要
  • 1993 実績報告書
  • 研究成果

    (7件)

すべて その他

すべて 文献書誌 (7件)

  • [文献書誌] 森岡 弘志: "Cloning of V_H and V_L genes for antibodies specific for pyrimidine photo dimers" Nucleic Acids Symposium Series. 29. 111-112 (1993)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1994 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] 森岡 弘志: "Construction and expression of single chain F_V genes for pyrimidine (6-4) photoproduct" 発表予定.

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1994 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] 森岡 弘志: "Cloning of genes for monoclonal antibodies of(cis-syn)cyclobutane thyminedimer using a phage display system" 発表予定.

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1994 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] MORIOKA,Hiroshi: "Cloning of V_H and V_L genes for antibodies specific for pyrimidine photo dimers" Nucleic Acids Symposium Series. 29. 111-112 (1993)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1994 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] MORIOKA,Hiroshi: "Construction and expression of single chain Fv genes for pyrimidine (6-4) photoproduct" (in preparation).

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1994 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] MORIOKA,Hiroshi: "Cloning of genes for monoclonal antibodies of (cis-syn) cyclobutane thyminedimer using a phage display system" (in preparation).

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1994 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Hiroshi Morioka: "Cloning of V_H and V_L genes for antibodies specific for pyrimidine photo dimers" Nucleic Acids Symposium Series. 29. 111-112 (1993)

    • 関連する報告書
      1993 実績報告書

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公開日: 1993-04-01   更新日: 2016-04-21  

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