mtDNA塩基配列にもとづく埋葬人骨の近縁関係の推定

• 研究課題/領域番号: 05835002
• 研究種目: 一般研究(C)
• 配分区分: 補助金
• 研究分野: 文化財科学
• 研究機関: 九州大学 (1994-1995); 埼玉大学 (1993)
• 研究代表者: 小池 裕子 九州大学, 大学院比較社会文化研究科, 教授 (40107462)
• 研究分担者: 田中 良之 九州大学, 大学院比較社会文化研究科, 教授 (50128047)
• 研究期間 (年度): 1993 – 1995
• 研究課題ステータス: 完了 (1995年度)
• 配分額: 2,100千円 (直接経費: 2,100千円); 1995年度: 500千円 (直接経費: 500千円); 1994年度: 700千円 (直接経費: 700千円); 1993年度: 900千円 (直接経費: 900千円)
• キーワード: ミトコンドリアDNA / 人骨

研究概要

近年PCR法の開発およびDNA塩基配列決定法が改良されてから、DNAレベルの多型解析が急速に進展してきた。ミトコンドリア内に存在するmtDNAは,約16500塩基対の塩基配列がすでに明らかにされている。そのmtDNAは核DNAに比べ塩基置換速度が5〜10倍速く、中でもnon-coding領域の多型性は近縁種間の変異の解析にとって有効な材料である。本研究では、出土人骨のDNA解析に最も適したmtDNAのD-loop部位を対象に,遺跡出土人骨からのDNA多型解析法の確立をめざし次のことを行った.
(1)分析対象として,比較的新しい時期の保存のよい埋葬人骨を用いた.
(2)DNA抽出法の検討:低温下での人骨の粉砕法,脱灰法,およびDNA回収法 について検討した.
(3)PCR法の検討:古人骨から抽出したDNAは,塩基の変質や切断が起こっているので,primerの位置や長さ,PCRの温度などの最適条件を検討した.D-loop部位は二次構造を作りやすい配列をもつが多く,hot-startをするなどの工夫が必要であった.
(4)塩基配列法の検討:サイクルシーケンス法およびオートシーケンス法を検討した.PCR産物は精製が必要で,サイクルシーケンスを行えば,少量の鋳型DNAで良好な結果が得られた。