| 研究課題/領域番号 |
06557044
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| 研究種目 |
基盤研究(A)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 試験 |
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| 研究分野 |
循環器内科学
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| 研究機関 | 大阪大学 |
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研究代表者 |
倉智 嘉久 大阪大学, 医学部, 教授 (30142011)
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| 研究分担者 |
山田 充彦 大阪大学, 医学部, 助手 (10263237)
内匠 透 大阪大学, 医学部, 助手 (00222092)
堀 正二 大阪大学, 医学部, 教授 (20124779)
堀尾 嘉幸 大阪大学, 医学部, 講師 (30181530)
高橋 尚彦 大阪大学, 医学部, 助手 (30263239)
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| 研究期間 (年度) |
1994 – 1996
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| 研究課題ステータス |
完了 (1996年度)
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| 配分額 *注記 |
15,400千円 (直接経費: 15,400千円)
1996年度: 2,200千円 (直接経費: 2,200千円)
1995年度: 6,300千円 (直接経費: 6,300千円)
1994年度: 6,900千円 (直接経費: 6,900千円)
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| キーワード | ATP感受性カリウムチャネル / 心臓 / 平滑筋 / クローニング / スルフォニル尿素受容体 / ATP / カリウムチャネルオープナ- / 培養細胞 / スルフオニル尿素受容体 / カリウム / チャネル / ATP感受性チャネル / スルフォニルウレア / cDNA / パッチクランプ / K_<ATP>チャネル / NDP / G蛋白 |
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| 研究概要 |
ATP感受性カリウムチャネル(K_<ATP>)に対するカリウムチャネルオープナ-(KCO)の効果はこのチャネルのサブタイプによって異なっている。この分子機構を解明し、KCOの開発の理論的な基礎を構築するため、脳cDNAライブラリーからサブユニットであるBIRとuK_<ATP>をクローン化した。また、心臓からスルフォニル尿素受容体SUR2A,SUR2B cDNAを新たにクローン化した。SUR2Bはdifferential splicingによってSUR2Aと同じ遺伝子から作られると考えられ、C末端の42個のアミノ酸配列はSUR1に似ていた。SUR2A、SUR2B共に培養細胞(HEK)においてBIRもしくはuK_<ATP>とともに共発現させることによってK_<ATP>が出現した。SUR2Bの発現は広く分布しており、uK_<ATP>と共に培養細胞HEKに発現させたところ、ATPの阻害効果はMg-ATP complexの阻害効果よりも強いことや、ピナシジルやジアゾキサイドが共によく効く等、血管平滑筋に存在するATP感受性カリウムチャネルに非常に似た性質のチャネルを発現することがわかった。これははじめての血管平滑筋型ATP感受性カリウムチャネルのクローニングである。一方、SUR2AとBIRを構成サブユニットとするK_<ATP>は心臓のK_<ATP>チャネルの性質と非常に似ていた。即ち、ATPの阻害効果はMg-ATP complexの阻害効果とほぼ同等であり、一方、KCOの効果ではジアゾキサイドに反応しにくく、ピナシジルはよく効くことなど心筋K_<ATP>に非常によく似ていた。SUR2AとBIRによるK_<ATP>はSUR2BとBIRのチャネルに比べニコランジルの効果が約1/10と効きにくいことが判明した。また、BIRとuK_<ATP>のキメラによる解析から2つの膜貫通領域とそれにはさまれた領域がコンダクタンスの大きさを決定することがわかった。以上のように、K_<ATP>のクローンを培養細胞に発現させてパッチクランプ法で測定することによりKCOのK_<ATP>サブタイプ別の効果を客観的に評価する系を確立することができた。
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