| 研究課題/領域番号 |
09557062
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| 研究種目 |
基盤研究(B)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 展開研究 |
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| 研究分野 |
小児科学
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| 研究機関 | 北海道大学 |
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研究代表者 |
小林 邦彦 北海道大学, 医学部, 教授 (60091451)
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| 研究分担者 |
真船 直樹 北海道大学, 医学部, 助手 (70241304)
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| 研究期間 (年度) |
1997 – 1998
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| 研究課題ステータス |
完了 (1998年度)
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| 配分額 *注記 |
9,200千円 (直接経費: 9,200千円)
1998年度: 3,300千円 (直接経費: 3,300千円)
1997年度: 5,900千円 (直接経費: 5,900千円)
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| キーワード | オステオポンチン / Ca-結合性 / 人母乳 / 人血清 / 分子不安定性 / Ca結合蛋白 / 母乳 / 血清 |
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| 研究概要 |
オステオポンチンは,骨、腎、血管壁、白血球、血清、母乳など様々な組織に存在する結合性の酸性リン酸糖蛋白で、その機能は骨形成における骨芽細胞、破骨細胞の動員や、Ca代謝に関与する他、接着分子としての働きもある多機能分子と考えられている。我々は本蛋白質が母乳中に比較的多量に存在することに注目し、その生物学的機能の一つとして小児の発達における骨形成に関与する分子と位置づけ、それを解明する事を目的として、母乳や血清、白血球の本蛋白質の精製と解析を試みた。
[結果]1)人母乳から隣蛋白を精製し、そのN末端アミノ酸配列から、人母乳オステオポンチンと同定した。2)この分子を家兎に免疫し、抗オステオポンチン抗体を作製し、オステオぽンチンの免疫化学的性格を検討した。3)抗体による解析で、精製母乳のオステオぽンチンほ78kDを主体とする分子であるが、小さな分子のfragmentをほば50%に含む分子分の集合であつた。4)抗体を指標として、血清の隣蛋白中にオステオポンチンの同定を試みたが、Western blot法では50kD以下の小分子分画に複数の抗体反応物質として同定はできたが、沈降反応やELISA法では反応物質の存在は確認できなかった。ただし、血清の隣蛋白はELISAや沈降反応による母乳オステオポンチンと抗体の反応を阻害する活性を有していた。5)人白血球の細胞質蛋白にWestern blotで、血清と同様の小分子分画に抗体反応物質の存在が認められた。6)血清の隣蛋白分画に見られるオステオポンチン様物質は、保存で容易に小さな分子に分解され、その分解は通常の蛋白分解酵素阻害剤の添加では抑制できなかった。
[考察]母乳中のオステオポンチンは、比較的不安定な分子として分離同定できることが、明らかになった。一方、血清中にもオステオポンチン相当物質があるが、分子的に非常に不安定で、容易に自己分解して小分子に転換する性格があることが示された。この両物質がともに同一の遺伝子産物とすると、何故組織によってその性質が異なるかは興味ある命題である。一方、オステオポンチンの易分解性が何に起困するかは今のところ不明であるが、この易分解性に何らかの生物学的意義がある可能性が考えられ、現在研究中である。
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