| 研究課題/領域番号 |
10640596
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
分離・精製・検出法
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| 研究機関 | 東京薬科大学 |
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研究代表者 |
松原 チヨ 東京薬科大学, 生命科学部, 教授 (10057309)
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| 研究分担者 |
櫻井 照明 東京薬科大学, 生命科学部, 助手 (30266902)
齋藤 徹 東京薬科大学, 生命科学部, 講師 (40186945)
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| 研究期間 (年度) |
1998 – 1999
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| 研究課題ステータス |
完了 (1999年度)
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| 配分額 *注記 |
3,300千円 (直接経費: 3,300千円)
1999年度: 500千円 (直接経費: 500千円)
1998年度: 2,800千円 (直接経費: 2,800千円)
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| キーワード | 温度感応性高分子 / エンドトキシン / リポ多糖 / 両親媒性物質 / ポリ(Nーイソプロピルアクリルアミド) / 分離・濃縮 / 生体関連試料 / 疎水性 / ポリ(N-イソプロピルアクリルアミド) / 脂溶性毒物 / 菌体培養液 |
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| 研究概要 |
微生物や動植物が産生するタンパク質やホルモン溶液あるいは血清などに含まれ、ショック症状を引き起こす有毒性リポ多糖であるエンドトキシンを簡易迅速かつ高効率に除去する方法が望まれている。本研究では、水溶液中の温度感応性高分子ポリ(N-イソプロピルアクリルアミド)(以下PNIPAAm)が臨界温度(約32℃)以上で 折出・凝集し、その際に水中の微量疎水性有機化合物を凝集体(固相)中に濃縮・分離する現象に着目し、PNIPAAmを捕集媒体として、血清や菌体培養液から両親媒性毒物であるエンドトキシン類を除去する簡易迅速な分離法を構築するための基礎的検討を行った。
1.抽出媒体PNIPAAmの性能 PNIPAAmの構造が、高分子凝集相へのエンドトキシン類の取り込みに及ぼす影響を系統的に調べ、重合数1000(分子量125,000)のPNIPAAmを媒体として用いることにした。PNIPAAm媒体は、その取り込みが疎水性支配でありながら親水性要因も影響する特異な性能を有するので、両親媒性物質であるエンドトキシンには特に適した媒体である。
2.PNIAAmとエンドトキシンの相互作用が捕集効率に及ぼす影響 エンドトトキシンの疎水性がその捕集効率に及ぼす影響を明らかにした。尚、リポ多糖であるエンドキシンは、糖鎖部分が多様なので、アルキルフェノールエトキシレート(以下EPEO)をモデル化合物とし、分配の要因を明らかにした。EPEOのPNIPAAm(固相)-水相間の分配定数K_Dは、抽出分離の媒体として応用するのに十分な値を示し、K_DはEPEOの構造に依る親水性-疎水性バランス(HLB)値と高い相関性を示した。この結果に基づいて、エンドトキシンに対する高い捕集効率を示す分離システムを構築するガイドラインを得た。実際試料に応用したところエンドトキシンは7千倍に濃縮・捕集され、その除去率は40%であった。
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