| 研究課題/領域番号 |
10650777
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
生物・生体工学
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| 研究機関 | 筑波大学 |
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研究代表者 |
王 碧昭 筑波大学, 応用生物化学系, 助教授 (80261775)
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| 研究分担者 |
松村 正利 筑波大学, 応用生物化学系, 教授 (50015781)
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| 研究期間 (年度) |
1998 – 1999
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| 研究課題ステータス |
完了 (1999年度)
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| 配分額 *注記 |
3,500千円 (直接経費: 3,500千円)
1999年度: 1,700千円 (直接経費: 1,700千円)
1998年度: 1,800千円 (直接経費: 1,800千円)
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| キーワード | 腎糸球体上皮細胞 / メサンギウム細胞 / 免疫寛容 / 遺伝子導入 / 不死化 / 細胞共培養 / 細胞外マトリクス / コラーゲンガーゼゲル / 腎系球体上皮細胞 |
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| 研究概要 |
本研究は遺伝子操作により、免疫複合体を除去する機能を付加させた腎糸球体細胞を、糸球体基底膜成分に類似す生分解性高分子素材に植え付け、細胞外環境を人工的に設計、構造化し、それらの相互作用を持つ細胞間基質(マトリックス)を用い、機能強化細胞群を取り込むことによって、複合ハイブリッド腎組織を生体外で形成させ、取り扱い易い形状にした人工腎ユニットを構築する研究を行い、将来移植可能な人工腎臓の根幹となすキーテクノロジーを確立することを目的とする。
平成10年度は既に、細胞の免疫複合体の除去能及び免疫寛容能を支配する遺伝子を腎糸球体上皮細胞に導入した。また、細胞不死化に効果する遺伝子E6,E7を用い、腎糸球体メサンギウム細胞の不死化を行った。
平成11年度は腎糸球体上皮細胞及びメサンギウム細胞の生体外の共培養および細胞間相互作用を検討した。共培養の最適培地のみならず、細胞外マトリクスであるECM(excellular matrix)、コラーゲンゲルも用い、細胞培養の最適条件を検討した。また生体内では、メサンギウム細胞と上皮細胞が基底膜の両側に存在するため、アスコルビン酸添加したコラーゲン溶液中にガーゼを浸漬し、UV照射によりゲルを架橋し、形成したガーゼゲルの両側に二種類の細胞をそれぞれ植え付けて培養した。
結果として、ECMは腎糸球体上皮細胞を蜂巣状を引き起こし、メサンギウム細胞の伸縮性を抑制した。一方、コラーゲンゲルは上皮細胞を集落的に増殖させたが、アスコルビン酸をさらに添加すると、両細胞が順調に増殖した。ガーゼゲルの両側に細胞を共培養した結果、上皮細胞がシート様に増殖したが、メサンギウム細胞がガーゼの枝に付着増殖し、さらに凝集した。FDA(生細胞を判定する試薬)とPI(死細胞を判定する試薬)の染色により、細胞の生存が確認された。これらの結果により、ガーゼが栄養分及び酵素などをトランスポートしたことを示唆した。また、ガーゼゲルは細胞共培養の軟足場として使われることが明らかとなった。
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