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C型肝炎ウイルス感染複製阻害および病態制御法の開発

研究課題

研究課題/領域番号 11557025
研究種目

基盤研究(B)

配分区分補助金
応募区分展開研究
研究分野 ウイルス学
研究機関(財)東京都医学研究機構

研究代表者

小原 道法  財団法人 東京都医学研究機構, 東京都臨床医学総合研究所, 研究員 (10250218)

研究分担者 藤田 尚志  東京大学, 医科学研究所, 研究員 (10156870)
米川 博通  東京大学, 医科学研究所, 研究員 (30142110)
小原 恭子  東京大学, 医科学研究所, 講師 (20225478)
土屋 政幸  中外製薬(株), 創薬資源研究所, 研究員
豊田 哲也  久留米大学, 医学部, 教授 (00197972)
研究期間 (年度) 1999 – 2000
研究課題ステータス 完了 (2000年度)
配分額 *注記
13,500千円 (直接経費: 13,500千円)
2000年度: 6,700千円 (直接経費: 6,700千円)
1999年度: 6,800千円 (直接経費: 6,800千円)
キーワードC型肝炎ウイルス / 感染性cDNAクローン / トランスフォーム / C型肝炎ウィルス / インターフェロン / シグナル伝達 / HCV cDNAクローン
研究概要

C型肝炎ウイルス(HCV)の感染、複製過程、細胞外への放出機構は、効率のよいin vitro感染系がないために、全く明らかになっていない。本機構を解析するために、HCV感染性cDNAクローンを樹立し、肝細胞で発現させ、ウイルス粒子成熟過程および細胞外への放出機序およびこれに関わる因子および再感染過程を解析することを目的とした。チンパンジーにHCV感染者の血清を接種し、PCR価が高く、かつ感染価との差の小さい検体を選びHCV全遺伝子のクローニングを行った。HCV全遺伝子のcDNAあるいはRNAを細胞にトランスフエクションし、HCV蛋白質を発現させた。遺伝子複製効率についてはRTD-PCR法により、粒子形成の有無については培養上清の密度勾配遠心および免疫電子顕微鏡法により検討を行った。さらにこの培養上清を用いて再感染を行った。これらの検討から、3'X領域の有無が細胞内での遺伝子複製効率に関与していることが示された。3'X領域を持っている方が10-100倍以上効率が高くなる傾向をしめした。また、HCVcDNAを導入発現した細胞内の免疫電顕による検討から、細胞質内に50-60nmのウイルス様粒子が認められた。培養上清を蔗糖密度勾配遠心にかけ、分画のコア蛋白質量およびRNA量を測定したところ、1.10、1.25の密度にピークが観察され、免疫電子顕微鏡による検討から50-60nmの抗エンベロープ抗体と特異的に反応するウイルス様粒子が認められた。培養上清中には108-9copy/mlと多量のウイルス粒子が産生され、これを用いてin vitroおよび小型原猿類のツバイに感染実験を行ったところ効率よく感染、複製をした。
HCV全長遺伝子より産生されたウイルス粒子が再感染増殖性を示したことから、reverse geneticsによるHCV遺伝子機能及び宿主因子との相互作用の解析が可能となった。今後、ウイルス複製を担うウイルス側および細胞側因子を同定し、ウイルスゲノムとウイルス蛋白質および細胞側因子との相互作用を明らかにすべく研究を進めている。

報告書

(3件)
  • 2000 実績報告書   研究成果報告書概要
  • 1999 実績報告書
  • 研究成果

    (53件)

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すべて 文献書誌 (53件)

  • [文献書誌] Michinori Kohara: "Hepatitis C virus replication and pathogenesis."J.Dermatological Science. 22. 161-168 (2000)

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  • [文献書誌] Arata Honda: "Hepatitis C virus structural proteins induce liver cell injury in transgenic mice"J.Hepatol.. 33. 440-447 (2000)

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  • [文献書誌] Takaji Wakita: "A possible role of cytotoxic T cells on acute liver injury in hepatitis C virus cDNA transgenic mice mediated by Cre/loxP system"J.Med.Virol. 62. 308-317 (2000)

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  • [文献書誌] Masayuki Matsumura: "Simple quantitative assay of alpha-petoprotein mRNA in liver tissue using the real-time detection polymerase chain assay-Its application for clinical use"Hepatology Research. (in press). (2001)

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  • [文献書誌] Satoshi Ishida: "Icosahedral hepatitis C virus core particles detected by immunoelectron microscopy and rotation technique"Hepatology Research. (in press). (2001)

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  • [文献書誌] Keigo Machida: "Inhibition of cytochrome C release in Fas-mediated. signaling pathway in transgenic mice induced to express hepatitis C viral proteins"J.Biol.Chem.. (in press). (2001)

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  • [文献書誌] Thomas Hugle: "The hepatitis C virus nonstructural protein 4B is an integral endoplasmic reticulum membrane protein"Virology. (in press). (2001)

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  • [文献書誌] Kyoko T-Kohara: "Adipose tissue reduction in mice lacking the translational inhibitor 4E-BP1"Nature Med.. (in press). (2001)

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  • [文献書誌] Takeuchi T., Katsume A., Tanaka T., Abe A., Tsukiyama-Kohara K., Kawaguchi R., Tanaka S.and Kohara M.: "Real-time detection system for quantification of hepatitis C virus genome."Gastroenterology. 116. 636-642 (1999)

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  • [文献書誌] Tanaka T., Hess G., Schlueter V., Zdunek D., Tanaka S.and Kohara M.: "interferon treatment of patients co-infected with HGV and HCV : Correlation of treatment response with serum anti-HGV Envelope (E2) protein antibody and genomic RNA."J.Med. Virol.. 57. 370-375 (1999)

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  • [文献書誌] Inoue, K., Yoshiba, M., Sekiyama, K.and Kohara M.: "Possible association between serum GB virus C RNA level and disease activity in fulminant hepatitis type"G.J.Hepatology. 30. 801-806 (1999)

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  • [文献書誌] Hirota M., Satoh S., Asabe S., Kohara M., Tsukiyama-Kohara K., Kato N., Hijikata M.and Shimotohno K.: "Phosphorylation of nonstructural 5A protein of Hepatitis C virus : HCV group-specific hyperphosphorylation."Virology. 257. 130-137 (1999)

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  • [文献書誌] Abe A., Inoue K., Tanaka T., Kato J., Kajiyama N., Kawaguci R., Tanaka S., Yoshiba M.and Kohara M.: "Quantitation of hepatitis B virus genomic DNA by real time detection-PCR"J.Clin. Microbiology. 37. 2899-2903 (1999)

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  • [文献書誌] Honda A.Arai Y., Hirota N., Sato T., Ikegaki J., Koizumi T., Hatano M., Kohara M., Moriyama T., Imawari M., Shimotohno K.and Tokuhisa T.: "Hepatitis C virus structural proteins induce liver cell injury in transgenic mice"J.Med. Virol.. 59. 281-289 (1999)

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  • [文献書誌] Sabile A., Perlemuter G., Bono F., Tsukiyama-Kohara K., Kohara M., Demaugre F., Matsuura Y., Brechot C.and Barba G.: "Hepatitis C virus core protein binds to apolipoprotein AII and its secretion is modulated by fibrates."Hepatology. 30. 1064-1076 (1999)

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  • [文献書誌] Kuramochi, S., Matsuda, Y., Okamoto, M., Kitamura, F., Yonekawa, H.and Karasuyama, H.: "Molecular cloning of the human gene STK10 encoding LOK (lymphocyte-oriented kinase) and comparative chromosomal mapping of the human, mouse and rat homologues."Immunogenetics. 49. 369-375 (1999)

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  • [文献書誌] Matsuoka, K., Taya, C., Kubo, S., Toyama-Sorimachi, N., Kitamura, F., Ra, C., Yonekawa, H.and Karasuyama, H.: "Establishment of antigen-specific IgE transgenic mice to study pathological and immunobiological roles of IgE in vivo"Int Immunol.. 11. 987-994 (1999)

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  • [文献書誌] Kanai-Azuma, M., Kanai, Y., Okamoto, M., Hayashi, Y., Yonekawa, H.and Yazaki, K.: "Nrk : a murine X-linked NIK (Nck-interacting kinase)-related kinase gene expressed in skeletal muscle."Mech. Develop.. 89. 155-159 (1999)

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  • [文献書誌] Endo, J., Toyama-Sorimachi, N., Taya, C., Kuramochi-Miyagawa, S., Nagata, K., Kuida, K., Takashi, T., Yonekawa, H., Yoshizawa, Y., Miyasaka, N.and Karasuyama, H.: "Deficiency of a STE20/PAK family kinase LOK leads to the acceleration of LEA-1 clustering and cell adhesion of activated lymphocytes."FEBS lett.. 468. 234-238 (2000)

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  • [文献書誌] Tagawa, K., Taya, C., Hayashi, Y., Nakagawa, M., Ono, Y., Fukuda, R., Karasuyama, H., Toyama-Sorimachi, N., Katsui, Y., Hata, S., Ishiura, S., Nonaka, I., Seyama, Y., Arahata, K., Yonekawa, H., Sorimachi, H., Suzuki, K.: "Myopathyphenotype of transgenic mice expressing active site-mutated inactive p94 skeletal muscle-specific calpain, the gene product responsible for limb girdle muscular dystrophy type 2A."Hum. Mol. Genet.. 9. 1393-1402 (2000)

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  • [文献書誌] Yakimenko, L.V., Korobitsyna, K.V., Frisman, L.V., Moriwaki, K and Yonekawa, H.: "Genetic studies on house mice from the hybrid zone of Primorskii Krai (Original in Russian)"Russian J.Genetics. 36. 77-86 (2000)

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  • [文献書誌] Yamaoka, M., Isobe, K., Shitara, H., Yonekawa, H., Miyabayashi, S., Hayashi, J.-I.: "Complete repopulation of mouse mitochondrial DNA-less cells with rat mitochondrial DNA restores mitochondrial translation but not mitochondrial respiratory function."Genetics.. 155. 301-307 (2000)

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  • [文献書誌] M.Kohara: "Hepatitis C virus replication and pathogenesis."J.Dermatological Science. 22. 161-168 (2000)

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  • [文献書誌] A.Honda, Y.Arai, N.Hirota, T.Sato, J.Ikegaki, T.Koizumi, M.Hatano, M.Kohara, T.Moriyama, M.Imawari, K.Shimotohno, and T.Tokuhisa: "Hepatitis C virus structural proteins induce liver cell injury in transgenic mice."J.Hepatol. 33. 440-447 (2000)

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  • [文献書誌] T.Wakita, A.Katsume, J.Kato, C.Taya, H.Yonekawa, Y.Kanegae, I.Saito, Y.Hayashi, M.Koike, M.Miyamoto, Y.Hiasa, and M.Kohara: "A possible role of cytotoxic T cells on acute liver injury in hepatitis C virus cDNA transgenic mice mediated by Cre/loxP system."J.Med. Virol.. 62. 308-317 (2000)

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  • [文献書誌] Suzuki, H., Chiba, T., Suzuki, T., Fujita, T., Ikenoue, T., Omata, M., Furuichi, K., Shikama, H., and Tanaka, K.: "Homodimer of two F-box proteins bTrCP1 or bTrCP2 binds to IkBa for signal-dependent ubiquitination :"J.Biol. Chem.. 275. 2877-2884 (2000)

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  • [文献書誌] Susumu Tomita, Takashi Fujita, Yutaka Kirino, and Toshiharu Suzuki: "PDZ Domain-dependent Suppression of NF-kB/p65-induced Ab42 Production by a Neuron-specific X11-like Protein"J.Biol. Chem.. 275. 13056-13060 (2000)

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  • [文献書誌] Koyu Hara, Mayumi Shiota, Hiroshi Kido, Yasushi Ohtsu, Takahito Kashiwagi, Jun Iwahashi, Nobuyuki Hamada, Kazutoshi Mizoue, Naoki Tsumura, Hirohisa Kato, Tetsuya Toyoda: "Influenza virus RNA polymerase PA subunit is a novel serine protease with Ser624 in the active site"Genes to Cells. (in press). (2000)

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  • [文献書誌] T.Toyoda, K.Masunaga, Y.Ohtsu, K.Hara, N.Hamada, T.Kashiwagi, and J.Iwahashi: "Antibody-scanning and epitope-tagging methods : Molecular mapping of proteins using antibodies."Curr. Protein Peptide Sci. (in press). (2000)

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  • [文献書誌] M.Hatta, Y.Asano, K.Masunaga, T.Ito, K.Okazaki, T.Toyoda, Y.Kawaoka, A.Ishihama, and H.Kida: "Epitope mapping of the influenza A virus RNA polymerase PA using monoclonal antibodies."Arch. Virol.. 145. 957-964 (2000)

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  • [文献書誌] Tetsuya Toyoda, Yoshihiro Imamura, Hiroshi Takaku, Takahito Kashiwagi, Koyu Hara, Jun Iwahashi, Yasushi Ohtsu, Naoki Tsumura, Hirohisa Kato, Nobuyuki Hamada: "Inhibition of influenza virus replication in cultured cells by RNA-cleaving DNA enzyme."FEBS Lett.. 481. 113-116 (2000)

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  • [文献書誌] Wakako Suhara, Mitsutoshi Yoneyama, Tomokatsu Iwamura, Shoko Yoshimura, Keiko Tamura, Hideo Namiki, Saburo, Aimoto and Takashi Fujita: "Analyses of Virus-Induced Homomeric and Heteromeric Protein Associations between IRF-3 and Coactivator CBP p300"J.Biochem.. 128. 301-307 (2000)

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  • [文献書誌] M.Matsumura, M.Ijichi, Y.Shiratori, G.Togo, Y.Hikiba, K.Inoue, M.Kohara and M.Omata: "Simple quantitative assay of alpha-petoprotein mRNA in liver tissue using the real-time detection polymerase chain assay - Its application for clinical use -."Hepatology. (in press).

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  • [文献書誌] S.Ishida, M.Kaitou, M.Kohara, K.Tsukiyama-Kohara, N.Fujita, J.Ikoma, Y.Adachi and S.Watanabe: "Icosahedral hepatitis C virus core particles detected by immunoelectron microscopy and rotation technique."Hepatology Research. (in press).

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  • [文献書誌] K.Machida, K.Tsukiyama-Kohara, E.Seike, S.Tone, F.Shibasaki, M.Shimizu, H.Takahashi, Y.Hayashi, N.Funada, C.Taya, H.Yonekawa and M.Kohara: "Inhibition of cytochrome C release in Fas-mediated signaling pathway in transgenic mice induced to express hepatitis C viral proteins."J.Biol. Chem.. (in press).

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  • [文献書誌] Sumida, M., Kaneda, H., Kato, Y., Kanamori, Y., Yonekawa, H.and Nishioka, M.: "Sequence variation and structural conservation in the D-loop region and flanking genes of mitochondrial DNA from Japanese pond frogs."Genes Genet. Syst.. (in press).

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  • [文献書誌] Wakita, T., Katsume, A., Kato, J., Taya, C., Yonekawa, H., Kanegae, Y., Saito, I., Hayashi, Y., Koike, M., Miyamoto, M., Hiasa, Y.and Kohara, M.: "A possible role of cytotoxic T cells on acute liver injury in hepatitis C virus cDNA transgenic mice mediated by Cre/loxP system."J Med. Virol. (in press).

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  • [文献書誌] Shitara, H., Kaneda, H., Sato, A., Inoue, Y., Ogura, A., Yonekawa, H.and Hayashi, J.-I.: "Selective and continuous elimination occurs in microinjected mitochondria from spermatids but not from liver into mouse eggs."Genetics. (in press).

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  • [文献書誌] Kyoko Tsukiyama-Kohara, Francis Poulin, Michinori Kohara, Christine T.DeMaria, Alan Cheng, Zhidan Wu, Anne-Claude Gingras, Asao Katsume, Mounib Elchebly, Bruce M.Spiegelman, Mary-Ellen Harper, Michel L.Tremblay and Nahum Sonenberg: "Adipose tissue reduction in mice lacking the translational inhibitor 4E-BP1"Nature Med.. (in press). (2001)

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  • [文献書誌] Michinori Kohara: "Hepatitis C virus replication and pathogenesis."J.Dermatological Science. 22. 161-168 (2000)

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      2000 実績報告書
  • [文献書誌] Arata Honda: "Hepatitis C virus structural proteins induce liver cell injury in transgenic mice"J.Hepatol.. 33. 440-447 (2000)

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      2000 実績報告書
  • [文献書誌] Takaji Wakita: "A possible role of cytotoxic T cells on acute liver injury in hepatitis C virus cDNA transgenic mice mediated by Cre/loxP system"J.Med.Virol. 62. 308-317 (2000)

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  • [文献書誌] Masayuki Matsumura: "Simple quantitative assay of alpha-petoprotein mRNA in liver tissue using the real-time detection polymerase chain assay-Its application for clinical use-"Hepatology Research. (in press). (2001)

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      2000 実績報告書
  • [文献書誌] Satoshi Ishida: "Icosahedral hepatitis C virus core particles detected by immunoelectron microscopy and rotation technique"Hepatology Research. (in press). (2001)

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      2000 実績報告書
  • [文献書誌] Keigo Machida: "Inhibition of cytochrome C release in Fas-mediated signaling pathway in transgenic mice induced to express hepatitis C viral proteins"J.Biol.Chem.. (in press). (2001)

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      2000 実績報告書
  • [文献書誌] Thomas Hugle: "The hepatitis C virus nonstructural protein 4B is an integral endoplasmic reticulum membrane protein"Virology. (in press). (2001)

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      2000 実績報告書
  • [文献書誌] Kyoko T-Kohara: "Adipose tissue reduction in mice lacking the translational inhibitor 4E-BP1"Nature Med.. (in press). (2001)

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      2000 実績報告書
  • [文献書誌] T. Takeuchi: "Real-Time Detection System for Quantification of Hepatitis C Virus Genome"Gastroenterology. 116. 636-642 (1999)

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      1999 実績報告書
  • [文献書誌] M. Hirota: "Phosphorylation of Nonstructural 5A Protein of Hepatitis C Virus : HCV Group-Specific Hyperphosphorylation"Virology. 257. 130-137 (1999)

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      1999 実績報告書
  • [文献書誌] A. Abe: "Quantitation of hepatitis B virus genomic DNA by real time detection PCR"J. Clin. Micobiology. 37. 2899-2903 (1999)

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      1999 実績報告書
  • [文献書誌] A. Honda: "Hepatitis C virus structural proteins induce liver cell injury in transgenic mice"J. Med. Virol.. 59. 281-289 (1999)

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      1999 実績報告書
  • [文献書誌] A. Sabile: "Hepatitis C virus core protein binds to apolipoprotein All and its secretion is modulated by fibrates"Hepatology. 30. 1064-1076 (1999)

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      1999 実績報告書
  • [文献書誌] M. Kohara: "Hepatitis C virus replication and pathogenesis"J. Dermatological Science. 22. 161-168 (2000)

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      1999 実績報告書

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公開日: 1999-04-01   更新日: 2016-04-21  

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