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組織再生・修復に見られる細胞膜結合型増殖因子のShedding-その分子機構と役割-

研究課題

研究課題/領域番号 11670141
研究種目

基盤研究(C)

配分区分補助金
応募区分一般
研究分野 病態医化学
研究機関大阪大学

研究代表者

東山 繁樹  大阪大学, 医学部, 助教授 (60202272)

研究期間 (年度) 1999 – 2000
研究課題ステータス 完了 (2000年度)
配分額 *注記
3,600千円 (直接経費: 3,600千円)
2000年度: 700千円 (直接経費: 700千円)
1999年度: 2,900千円 (直接経費: 2,900千円)
キーワード創傷治癒 / HB-EGF / shedding / 増殖因子 / ケラチノサイト / 細胞株 / wound healing / EGFR / Keratinocyte / cell migration / Shedding / keratinocyte
研究概要

創傷治癒過程で見られる組織再生・修復の分子機構を細胞膜結合型増殖因子HB-EGFのプロセシング(shedding)の側面から解析し、以下の結果を得た。
1)HB-EGF shedding阻害剤として低分子性合成化合物KB-R8301を同定し、培養ケラチノサイトを用いたin vitro創傷実験、およびマウスを用いたin vivo創傷実験において、KB-R8301の添加によりケラチノサイトの遊走が顕著に阻害され、創傷治癒が抑制された。また、この創傷治癒抑制はリコンビナントHB-EGFの添加により完全に回復した。このから、皮膚創傷時において、内在性のHB-EGFがsheddingを受け、EGFRの活性化を誘導する事が強く示唆された。これらのことから損傷組織の修復時においてHB-EGF等の膜結合型増殖因子のsheddingが極めて重要なステップである事が示唆された。
2)HB-EGF shedding酵素を同定する為にKB-R8301固相化カラムを作製をアフィニティー精製を試みた。まず、KB-R8301をビオチン化しアビジンセファロースへの固相化を行った。KB-R8301のビオチン化によりHB-EGF shedding阻害活性は30%程度に低下したが、アフィニティーカラムとして使用し、ヒト繊維芽肉腫細胞株HT1080細胞のホモジネートより、KB-R8301結合蛋白質として3種類の蛋白質を単一標品にまで精製した。現在、蛋白質の一次構造を解析している。今後これらの蛋白質のcDNAを単離し、細胞に発現させ、HB-EGF shedding活性を検討する。

報告書

(3件)
  • 2000 実績報告書   研究成果報告書概要
  • 1999 実績報告書
  • 研究成果

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すべて 文献書誌 (36件)

  • [文献書誌] Nakano,N.,Higashiyama,S., et al.: "Purification and characterization of a novel vascular endothelial cell growth inhibitor secreted by macrophage-like U-937 cells."J.Biochem.. 125. 368-374 (1999)

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  • [文献書誌] Tanaka,N.,Higashiyama,S., et al.,: "Heparin-binding epidermal growth factor-like growth factor mRNA expression in neonatal rat brain with hypoxic/ischemic injury."Brain Res.. 827. 130-138 (1999)

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  • [文献書誌] Kayanoki,Y.,Higashiyama,S., et al.: "The Requirement of both Intracellular Reactive Oxygen Species and Intracellular Calcium Elevation for the Induction of Heparin-Binding EGF-like Growth Factor in Vascular Endothelial Cells and Smooth Muscle Cells."Biochem.Biophys.Res.Commun.. 259. 50-55 (1999)

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  • [文献書誌] Horikawa,M.,Higashiyama,S., et al.: "Upregulation of endogenous heparin-binding EGF-like growth factor and its role as a survival factor in skeletal myotubes."FEBS Lett.. 459. 100-104 (1999)

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  • [文献書誌] Yokosaki,Y.,Higashiyama,S., et al.: "The integrina961 binds to a novel recognition sequence (SvvYGLR) in the thrombin-cleaved amono terminal fragment of osteopontin."J.Biol.Chem.. 274. 36328-36334 (1999)

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  • [文献書誌] Kiso,S.,Higashiyama,S., et al.: "Expression of heparin-binding epidermal growth factor-like growth factor in the hepatocytes of fibroticrat liver during hepatocarcinogenesis."J.Gastroenterol.Hepatol.. 14. 1203-1209 (1999)

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  • [文献書誌] Yamada,K.,Higashiyama,S., et al: "Characterization of the human NTAK gene structure and distribution of isoforms for rat NTAK mRNA."Gene. 255. 15-24 (2000)

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  • [文献書誌] Tokumaru,S.,Higashiyama,S., et al.: "Ectodomain shedding of epidermal growth factor receptor ligands is required for keratinocyte migration in cutaneous wound healing."J.Cell Biol.. 151. 209-219 (2000)

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  • [文献書誌] Kitada,T.,Higashiyama,S., et al.: "Addition of bisecting N-acetylglucosamine residues to E-cadherin downregulates the tyrosine phosphorylation of β-catenin."J.Biol.Chem.. 275. 475-480 (2000)

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  • [文献書誌] Fujiyama,S.,Higashiyama,S., et al.: "Angiotensin AT1 and AT2 receptors differentially regulate angiopoietins and VEGF expression and angiogenesis by modulating HB-EGF-mediated EGF receptor transactivation."Cir.Res.. 88. 22-29 (2001)

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  • [文献書誌] Tokita,Y.,Higashiyama,S., et al.: "Regulation of neuregulin expression in the injured rat brain and cultured astrocytes."J.Neroscience.. 21. 1257-1264 (2001)

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  • [文献書誌] Koh,Y.H.,Higashiyama S., et al.: "Inactivation of glitathione peroxidase by No leads to the accumulation of H202 and the induction or HB-EGF via c-Jun NH2-terminal kinase in rat aortic smooth muscle cells."FASEB J.. (in press). (2001)

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  • [文献書誌] Nakano, N., Higashiyama, S., Takashima, S., Tsuruoka, N., Klagsbrun, M., and Taniguchi, N.: "Purification and characterization of a novel vascular endothelial cell growth inhibitor secreted by macrophage-like U-937 cells."J.Biochem.. 125. 368-374 (1999)

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  • [文献書誌] Tanaka, N., Sasahara, M., Ohno, M., Higashiyama, S., Hayase, Y., Shimada, M.: "Heparin-binding epidermal growth factor-like growth factor mRNA expression in neonatal rat brain with hypoxic/ischemic injury."Brain Res.. 827. 130-138 (1999)

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  • [文献書誌] Kayanoki, Y., Higashiyama, S., Suzuki, K., Asahi, M., Kawata, S., Matsuzawa, Y., Taniguchi, N.: "The Requirement of both Intracellular Reactive Oxygen Species and Intracellular Calcium Elevation for the Induction of Heparin-Binding EGF-like Growth Factor in Vascular Endothelial Cells and Smooth Muscle Cells."Biochem.Biophys.Res.Commun.. 259. 50-55 (1999)

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  • [文献書誌] Horikawa, M., Higashiyama, S., Nomura, S., Kitamura, Y., Ishikawa, M., and Taniguchi, N.: "Upregulation of endogenous heparin-binding EGF-like growth factor and its role as a survival factor in skeletal myotubes."FEBS Lett.. 459. 100-104 (1999)

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  • [文献書誌] Yokosaki, Y., Matuura, N., sasaki, T., Murakami, I., Schneider, H., Higashiyama, S., Saitoh, Y., Yamakido, M., Taooka, Y., Sheppard, D.: "The integrina9b1 binds to a novel recognition sequence (SVVYGLR) in the thrombin-cleaved amono terminal fragment of osteopontin."J.Biol.Chem.. 274. 36328-36334 (1999)

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  • [文献書誌] Kiso, S., Kawata, S., Tamura, S., Miyagawa, J., Ito, N., Tsushima, H., Yamada, A., Umeki, S., Higashiyama, S., Taniguchi, N., Matsuzawa, Y.: "Expression of heparin-binding epidermal growth factor-like growth factor in the hepatocytes of fibroticrat liver during hepatocarcinogenesis."J.Gastroenterol.Hepatol.. 14. 1203-1209 (1999)

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  • [文献書誌] Yamada, K., Ichino, N, Nishii, K., Sawada, H., Higashiyama, S., Ishiguro, H., Nagatsu, T.: "Characterization of the human NTAK gene structure and distribution of isoforms for rat NTAK mRNA."Gene. 255. 15-24 (2000)

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  • [文献書誌] Tokumaru, S., Higashiyama, S., Endo, T., Nakagawa, T., Miyagawa, J., Yamamori, K., Hanakawa, Y., Ohmoto, H., Yoshino, K., Shirakata, Y., Matsuzawa, Y., Hashimoto, K., and Taniguchi, N.: "Ectodomain shedding of epidermal growth factor receptor ligands is required for keratinocyte migration in cutaneous wound healing."J.Cell Biol.. 151. 209-219 (2000)

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  • [文献書誌] Kitada, T., Miyoshi, E., Noda, K., Higashiyama, S., Ihara, H., Matsuura, N., Hayashi, N., Kawata, S., Matsuzawa, Y., and Taniguchi, N.: "Addition of bisecting N-acetylglucosamine residues to E-cadherin downregulates the tyrosine phosphorylation of b-catenin."J.Biol.Chem.. 275. 475-480 (2001)

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  • [文献書誌] Fujiyama, S., Matsubara, H., Nozawa, Y., Maruyama, K., Mori, Y., Tsutsumi, Y., Masaki, H., Uchiyama, Y., Koyama, Y., Nose, A., Iba, O., Tateishi, E., Jyo, N., Ogata, N., Higashiyama, S., Yancopoulos, G.D., Iwasaki T.: "Angiotensin AT1 and AT2 receptors differentially regulate angiopoietins and VEGF expression and angiogenesis by modulating HB-EGF-mediated EGF receptor transactivation."Cir.Res.. 88. 22-29 (2001)

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  • [文献書誌] Tokita, Y., Keino H., Matsui, F., Aono, S., Ishiguro, H., Higashiyama, S., Oohira, A.: "Regulation of neuregulin expression in the injured rat brain and cultured astrocytes."J.Neroscience. 21. 1257-1264 (2001)

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  • [文献書誌] Koh, Y.H., Suzuki, K., Che, W., Park, Y.S.Miyamoto, Y., Higashiyama, S., Taniguchi, N.: "Inactivation of glutathione peroxidase by No leads to the accumulation of H_2O_2 and the induction of HB-EGF via c-Jun NH2-terminal kinase in rat aortic smooth muscle cells."FASEB J.. (in press). (2001)

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      2000 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Yamada,K.,Higashiyama,S., et al.: "Characterization of the human NTAK gene structure and distribution of isoforms for rat NTAK mRNA."Gene. 255. 15-24 (2000)

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      2000 実績報告書
  • [文献書誌] Tokumaru,S.,Higashiyama,S., et al.: "Ectodomain shedding of epidermal growth factor receptor ligands is required for keratinocyte migration in cutaneous wound healing."J.Cell Biol.. 151. 209-219 (2000)

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      2000 実績報告書
  • [文献書誌] Kitada,T.,Higashiyama,S., et al.: "Addition of bisecting N-acetylglucosamine residues to E-cadherin downregulates the tyrosine phosphorylation of β-catenin."J.Biol.Chem.. 275. 475-480 (2000)

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  • [文献書誌] Fujiyama,S.,Higashiyama,S., et al.: "Angiotensin AT1 and AT2 receptors differentially regulate angiopoietins and VEGF expression and angiogenesis by modulating HB-EGF-mediated EGF receptor transactivation."Cir.Res.. 88. 22-29 (2001)

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  • [文献書誌] Tokita,Y.,Higashiyama,S., et al.: "Regulation of neuregulin expression in the injured rat brain and cultured astrocytes."J.Neroscience.. 21. 1257-1264 (2001)

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  • [文献書誌] Koh,Y.H.,Higashiyama S., et al.: "Inactivation of glitathione peroxidase by No leads to the accumulation of H2O2 and the induction of HB-EGF via c-Jun NH2-terminal kinase in rat aortic smooth muscle cells."FASEB J.. (in press). (2001)

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  • [文献書誌] Nakano N.,Higashiyama S.Et al.: "Purification and characterization of a novel vascular endothelial cell growth inhibitor secreted by macrophage-like U-937 cells"J. Biochem.. 125. 368-374 (1999)

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  • [文献書誌] Tanaka N.,Higashiyama S.Et al.: "Heparin-binding epidermal growth factor-like growth factor mRNA expression in neonatal rat brain with hypoxic/ishemic injury"Brain Res.. 827. 130-138 (1999)

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  • [文献書誌] Kayanoki Y.,Higashiyama S.et al.: "The Requirement of both Intracellular Reactive Oxygen Species and Intracellular Calcium Elevation for the Induction of Heparin-Binding EGF-like Growth Factor in Vascular Endothelial Cells and Smooth Muscle Cells"Biochem. Biophys. Res. Commun.. 259. 50-55 (1999)

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  • [文献書誌] Horikawa M.,Higashiyama S.et al.: "Upregulation of endogenous heparin-binding EGF-like growth factor and its role as a survival factor in skeletal myotubes"FEBS Lett.. 459. 100-104 (1999)

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  • [文献書誌] Yokosaki Y.,Higashiyama S.et al.: "The integrina 9bl binds to a novel recognition sequence (SVVYGLR) in the thrombin-cleaved amono terminal fragment of osteopontin"J. Biol. Chem.. 274. 36328-36334 (1999)

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      1999 実績報告書
  • [文献書誌] Kiso S.,Higashiyama S.et al.: "Expression of heparin-binding epidermal growth factor-like growth factor in the hepatocytes of fibroticrat liver during hepatocarcinogenesis"J. Gastroenterol. Hepatol.. 14. 1203-1209 (1999)

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公開日: 1999-04-01   更新日: 2016-04-21  

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