| 研究概要 |
MAPキナーゼ(MAPK)スーパーファミリーは様々な細胞刺激応答系で重要な役割を果たすことが知られている。Expressed Sequence Tag(EST)データベースを既存のMAPKに特徴的なアミノ酸配列を基にサーチし、新規MAPKと予想されるクローンを得た。これをプローブとしたヒト及びマウスのcDNAライブラリーのスクリーニングにより、新規キナーゼの全長をクローニングしMOKと命名した。MOKはSer/Thrキナーゼに特徴的な配列を持ち、MAK,MRK及びMAPKにホモロジーが高かった。MOKはMBPやCyclin B1を良くリン酸化し、自己リン酸化活性を持っていた。MOKはactivation loop領域にキナーゼ活性に必須のTEYモチーフをもつ。またフォスファテース阻害剤オカダ酸により活性が増大するので、MOKはリン酸化によって活性化されることが示唆された。従来のMAPKを活性化する血清添加等の細胞処理ではMOKは活性化されず、発癌プロモーターTPA処理により活性が上昇した。これらの結果からMOKはMAPKスーパーファミリーに属する新しいキナーゼであると結論された。
次いで、COS細胞にMOKを発現させ、共免疫沈降実験によりMOKと結合するタンパク質を複数単離した。Mass Spectrometryと抗体を用いた実験から、これらのMOK結合タンパク質は、HSP90,HSC/HSP70,HSP60,Cdc37からなる分子シャペロン複合体であることが明らかとなった。分子シャペロンの結合はMOKの細胞内での安定な存在に必須であり、ゲルダナマイシン処理によりHSP90の機能を阻害することで細胞内でMOKは速やかにプロテアソームにより分解された。各種欠失変異体を用いた実験より、MOKの一次構造上でキナーゼドメインI-IVがHSP90との結合に必要と結論された。
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