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ヒト樹状細胞におけるHIV-1複製を制御する宿主因子に関する研究

研究課題

研究課題/領域番号 11F01216
研究種目

特別研究員奨励費

配分区分補助金
応募区分外国
研究分野 ウイルス学
研究機関独立行政法人理化学研究所

研究代表者

間 陽子  独立行政法人理化学研究所, 分子ウイルス学特別研究ユニット, ユニットリーダー

研究分担者 XUE Guangai  独立行政法人理化学研究所, 分子ウイルス学特別研究ユニット, 外国人特別研究員
研究期間 (年度) 2011 – 2012
研究課題ステータス 完了 (2012年度)
配分額 *注記
1,600千円 (直接経費: 1,600千円)
2012年度: 800千円 (直接経費: 800千円)
2011年度: 800千円 (直接経費: 800千円)
キーワードHIV-1Vpr / 非分裂細胞 / Macrophage / 樹状細胞 / マイクロアレイ法 / interferon / UBE2C遺伝子 / HIV-1感染 / 樹状細胞(DC) / Macrophage指向性ウイルス / adenovirusベクター / interferon誘導遺伝子 / 細胞周期停止
研究概要

ヒト免疫不全ウイルス1型(HIV-1)の特徴の一つがアクセサリー遺伝子を有する事である。特に、アクセサリー蛋白質Vprは、核移行、細胞周期のG2期停止、アポトーシスおよび免疫抑制などの多機能性を発揮することで、HIV-1複製に大きく寄与している。本研究では非分裂細胞におけるVprの未知の機能を解明するために、Vpr発現adenovirusベクターあるいはR5 tropic virusとそのVpr欠損ウイルスをMacrophageと樹状細胞に感染させ、Vprによって発現が変動する宿主遺伝子をマイクロアレイ法により網羅的に解析した。
昨年度は、MacrophageにおけるHIV感染において、Vpr発現によりinterferon誘導遺伝子、IFIT1,T2,MX2などの発現が低下することを明らかにした。一方、Vpr発現アデノウイルスベクターを用いた系では、これらの遺伝子の発現が上昇することを見出した。樹状細胞においても同様の傾向が認められた。そこで、本年度は引き続いてreal time PCRを行ない、Vpr発現によりIFN誘導遺伝子の発現上昇が確認されることを確認した。さらに、Western Blottingにおいて蛋白の発現レベルを解析した結果、STAT1,TRAIL,IRF7,ISG20の発現の上昇とSTAT1のリン酸化も増強されていることを立証した。以上の結果から、Vpr単独発現はType I interferonのJAK-STAT pathwayの活性化に関与することが示唆された。
続いて、Ubiquitin結合酵素の一つであるUBE2C遺伝子の発現がVprによって低下することが見出された。Real time PCRによって、感染後1,3および10日目にVprの発現によってUBE2C遺伝子抑制されることが確認された。そこで、UBE2Cをon-target siRNAによってノックダウンして、flow cytometryによって細胞周期の解析を行った。その結果、コントロールsiRNAに比べてUBE2C特異的siRNAを行った細胞はVprのG2期arrest効果を約10%上昇していた。さらに、ノックダウンすることにHIV-1感染における意義を解析し手いる。さらに、IFIT1,IFIT2およびIFIT3のHIV-1感染における役割を明らかにするために、IFIT1,IFIT2およびIFIT3のsiRNAによってノックダウン後に感染実験を行った。

報告書

(2件)
  • 2012 実績報告書
  • 2011 実績報告書
  • 研究成果

    (6件)

すべて 2012 2011

すべて 雑誌論文 (4件) (うち査読あり 4件) 学会発表 (2件)

  • [雑誌論文] The 5' flanking region and intronl of the bovine prion protein gene (PRNP) are responsible for negative feedback regulation of the prion protein2012

    • 著者名/発表者名
      Xue G, Aida Y, Onodera T, Sakudo A.
    • 雑誌名

      PLoS ONE

      巻: 7(3) 号: 3 ページ: e32870-e32870

    • DOI

      10.1371/journal.pone.0032870

    • 関連する報告書
      2012 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Synthesis and biological evaluation of deoxy-hematoxylin derivatives as a novel class of anti-HIV-1 agents.2012

    • 著者名/発表者名
      Ishii H, Koyama H, Hagiwara K, Miura T, Xue G, Hashimoto Y, Kitahara G, Aida Y, Suzuki M.
    • 雑誌名

      Bioorg. Med. Chem

      巻: 1; 22(3) 号: 3 ページ: 1469-74

    • DOI

      10.1016/j.bmcl.2011.06.066

    • 関連する報告書
      2012 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Synthesis and biological evaluation of hematoxylin derivatives as a Novel class of anti-HIV-1 reagents2012

    • 著者名/発表者名
      Hideki Ishii, Hiroko Koyama, Kyoji Hagiwara, Tomoyuki Miura, Guangai Xue, Y Hashimoto, G Kitahara, Yoko Aida, M Suzuki
    • 雑誌名

      Bioorg.Med.Chem.Lett.

      巻: 22 ページ: 1469-1474

    • 関連する報告書
      2011 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] The 5' flanking region and intronl of the bovine prion protein gene (PRNP) are responsible for negative feedback regulation of the prion protein2012

    • 著者名/発表者名
      Guangai Xue, Yoko Aida, Takashi Onodera, Akikazu Sakudo
    • 雑誌名

      PLoS ONE

      巻: (in press)

    • 関連する報告書
      2011 実績報告書
    • 査読あり
  • [学会発表] HIV-1 VPR Activates Type I Interferon Signaling Pathway In Macrophages And Dendritic Cells2011

    • 著者名/発表者名
      Guangai Xue, Muhammad A.Zahoor, Yoko Aida
    • 学会等名
      Cold Spring Harbor Laboratory Meeting on Retroviruses
    • 発表場所
      アメリカ合衆国
    • 関連する報告書
      2011 実績報告書
  • [学会発表] HIV-1 Vpr activates type I interferon signaling pathway in macrophages and related with interleukin-1 (IL-1) pathway in dendritic cells2011

    • 著者名/発表者名
      薛光愛、Muhammad A Zahoor、間陽子
    • 学会等名
      第25回日本エイズ学会学術集会・総会
    • 発表場所
      ハイアットリージェンシー東京(東京都)
    • 関連する報告書
      2011 実績報告書

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公開日: 2011-12-22   更新日: 2024-03-26  

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