Cyclin D1を分子標的とした治療不能消化器癌に対する遺伝子治療研究

• 研究課題/領域番号: 12770684
• 研究種目: 奨励研究(A)
• 配分区分: 補助金
• 研究分野: 消化器外科学
• 研究機関: 大阪大学
• 研究代表者: 山本 浩文 大阪大学, 医学系研究科, 助手 (30322184)
• 研究期間 (年度): 2000 – 2001
• 研究課題ステータス: 完了 (2001年度)
• 配分額: 2,400千円 (直接経費: 2,400千円); 2001年度: 800千円 (直接経費: 800千円); 2000年度: 1,600千円 (直接経費: 1,600千円)
• キーワード: cyclin D1 / 遺伝子治療 / アデノウイルス / アンチセンス / 消化器癌 / 大腸癌 / 肝癌 / アデノウィルス / アンチャンス / 食道癌

研究概要

(目的)Antisense cyclin D1(CyD1)を用いた消化器癌遺伝子治療の臨床応用のためには,いろいろの遺伝子異常背景をもった多数の癌細胞株を用いた検定が必須である。
(検討項目と結果)
A.癌細胞のCyD1量,遺伝子異常背景についての検討
大腸癌細胞株5種類,肝癌細胞株4種類について,RT-PCR法でCyD1 mRNA発現を,western blot法で蛋白量を検討した。またp53,K-raS, APC, beta-cateninの遺伝子背景について検討した。
B.Adenovirus発現系の構築
Simplified adenovirus transfer system(PNAS;95:2509-2514,1998)を用いて,感染により各種細胞株にantisense CyD1 mRNAを発現させる系を確立する。(進行状況)pcDNA3-CyD1plasmidより,CyD1cDNAを切り出し,adenovirus shattle vectorにantisense方向にsubcloningした。次に,adenovirus backbone vector(Easy1)とelectroporation法により特殊大腸菌の中で融合させ,recombinant AS CyD1 vectorを得た。同様に,遺伝子の組み込まれていないMock vector,およびGFPを発現するコントロールplasmid, FP+antisense CyD1を発現するplasmidの作製が完了した。さらに293細胞によってウイルス液を濃縮・精製して,生物学的効果判定の実験をすすめている。現在のところantisense CyD1は腫瘍の血管新生を抑制することがわかり、そのメカニズムを調べている。

研究成果

• [文献書誌] Miyata H, Yamamoto H, et al.: "Overexpression of CDC25B overrides radiation-induced G2-M arrest and results in increased apoptosis in esophageal cancer cells"Cancer Res. 61. 3188-3193 (2001)
• [文献書誌] Miyake Y, Yamamoto H, et al.: "Extensive micrometastases to lymph nodes as a marker for rapid recurrence of colorectal cancer : a study of lymphatic mapping"Clin Cancer Res. 7. 1350-1357 (2001)
• [文献書誌] Takamasa I, Yamamoto H, et al.: "Construction of Preferential cDNA Microarray Specialized for Human Colorectal Carcinoma : Molecular Sketch of Colorectai Cancer"Biochem Biophys Res Commun. 285. 1244-1249 (2001)
• [文献書誌] Nishioka K, Yamamoto H, et al.: "Clinical significance of CDC25A and CDC25B expression in squamous cell carcinomas of the oesophagus"Br J Cancer. 85. 412-421 (2001)
• [文献書誌] Hayashi N, Yamamoto H, et al.: "Differential expression of cyclooxygenase-2(COX-2)in human bile duct epithelial cells and bile duct neoplasm"Hepatology. 34. 638-650 (2001)
• [文献書誌] Miyata H, et al: "Overexpression of CDC25B overrides radiation-induced G2/M arrest and results in increased apoptosis in esophageal cancer cells."Cancer Res,. (in press). (2001)
• [文献書誌] Miyake Y, et al: "Extended micrometastases of lymph node as a maker for rapid recurrence of colorectal cancer."Clin Cancer Res,. (in press). (2001)
• [文献書誌] Takemasa I, et al: "Overexpression of CDC25B phosphatase as a novel marker of poor prognosis of human colorectal carcinoma."Cancer Res,. 60. 3043-50 (2000)
• [文献書誌] Shamma A, et.al: "Up-regulation of cyclooxygenase-2 in squamous carcinogenesis of the esophagus."Clin Cancer Res,. 6. 1229-38 (2000)
• [文献書誌] Tsujie M, et.al: "Expression of tumor suppressor gene p16(INK4) products in primary gastric cancer."Oncology. 58. 126-36 (2000)
• [文献書誌] Eguchi H, et.al: "Augmentation of antitumor activity of 5-fluorouracil by interferon alpha is associated with up-regulation of p27Kip1 in human hepatocellular carcinoma cells."Clin Cancer Res,. 6. 2881-90 (2000)
• [文献書誌] Miyake Y, et.al: "Quantification of micrometastases in lymph nodes of colorectal cancer using real-time fluorescence polymerase chain reaction."Int J Oncol,. 16. 289-93 (2000)
• [文献書誌] Ooka M, et.al: "Selection of mRNA markers for detection of lymph node micrometastases in breast cancer patients."Oncol Rep,. 7. 561-6 (2000)
• [文献書誌] Okami J, et al: "Genetic detection for micrometastasis in lymph node of biliary tract carcinoma."Clin Cancer Res,. 6. 2326-32 (2000)
• [文献書誌] Kondo M, et.al: "Expression of interferon・alpha/beta receptor in human hepatocellular carcinoma."Int J Oncol,. 17. 83-8 (2000)
• [文献書誌] Miyata H, et.al: "CDC25B and p53 are independently implicated in radiation sensitivity for human esophageal cancers."Clin Cancer Res,. 6. 4859-65 (2000)