ヒト人工染色体を利用した迅速な巨大ゲノム領域のクローニングおよび他細胞への移植

• 研究課題/領域番号: 15K06927
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 配分区分: 基金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: システムゲノム科学
• 研究機関: 公益財団法人かずさDNA研究所
• 研究代表者: 長谷川 嘉則 公益財団法人かずさDNA研究所, バイオ研究開発部, チーム長 (30387683)
• 研究期間 (年度): 2015-04-01 – 2018-03-31
• 研究課題ステータス: 完了 (2017年度)
• 配分額: 5,070千円 (直接経費: 3,900千円、間接経費: 1,170千円); 2017年度: 1,820千円 (直接経費: 1,400千円、間接経費: 420千円); 2016年度: 1,950千円 (直接経費: 1,500千円、間接経費: 450千円); 2015年度: 1,300千円 (直接経費: 1,000千円、間接経費: 300千円)
• キーワード: 巨大ゲノム / クローニング / ヒト人工染色体 / 部位特異的組換え / Vlox / Slox / 巨大DNA / 巨大ゲノム領域 / ベクター / トランスファー

研究成果の概要

CRISPR/Cas9システムの最適化により、目的遺伝子(GOI)の両側に部位特異的組換えサイトであるVLoxサイトとSLoxサイトの挿入効率を上げることができた。しかし、その効率は細胞種毎に大きく異なった。その後のHACベクターへのGOIの挿入では、細胞種間での効率には差が少なく、総DNA長が600kb以上についても成功した。GOI搭載HACベクターの、他細胞へのトランスファーには、試した細胞種全てにおいて成功した。1. 巨大ゲノム領域のHACベクターへのクローニング、2.巨大ゲノム領域搭載HACベクターの目的細胞へのトランスファーまでの工程を２ヶ月で完了させることは十分可能になった。

研究成果

• [雑誌論文] Identification of new abscisic acid receptor agonists using a wheat cell-free based drug screening system (2018)
  • 著者名/発表者名: Nemoto Keiichirou、Kagawa Makiko、Nozawa Akira、Hasegawa Yoshinori、Hayashi Minoru、Imai Kenichiro、Tomii Kentaro、Sawasaki Tatsuya
  • 雑誌名: Scientific Reports 巻: 8 号: 1 ページ: 4268-4268
  • DOI: 10.1038/s41598-018-22538-9
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Rbm10 regulates inflammation development via alternative splicing of Dnmt3b. (2017)
  • 著者名/発表者名: Atsumi T, Suzuki H, Jiang JJ, Okuyama Y, Nakagawa I, Ota M, Tanaka Y, Ohki T, Katsunuma K, Nakajima K, Hasegawa Y, Ohara O, Ogura H, Arima Y, Kamimura D, Murakami M.
  • 雑誌名: Int Immunol. 巻: 29(12) 号: 12 ページ: 581-591
  • DOI: 10.1093/intimm/dxx067
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] De Novo Assembly of the Transcriptome of Turritopsis, a Jellyfish that Repeatedly Rejuvenates (2016)
  • 著者名/発表者名: Yoshinori Hasegawa , Takashi Watanabe , Masaki Takazawa , Osamu Ohara and Shin Kubota
  • 雑誌名: Zoological Science 巻: 33 号: 4 ページ: 366-371
  • DOI: 10.2108/zs150186
  • NAID: 120005829359
  • 査読あり
• [学会発表] コムギ無細胞系を基盤としたABA 受容体とプロテインホスファターゼの相互作用の解析とその解析系を利用した新規ABA アゴニスト化合物の同定 (2017)
  • 著者名/発表者名: 根本圭一郎、香川真貴子、野澤 彰、長谷川嘉則、林実、今井賢一郎、富井健太郎、澤崎達也
  • 学会等名: 植物化学調節学会
• [学会発表] 次世代シークエンサーの活用法と次世代シークエンサーを用いた若返るベニクラゲの研究 (2017)
  • 著者名/発表者名: 長谷川嘉則
  • 学会等名: ベニクラゲ研究会
• [学会発表] Genetic and transcriptional analyses of plasma cells in POEMS syndrome (2017)
  • 著者名/発表者名: 永尾侑平、三村尚也、竹田淳恵、吉田健一、塩澤裕介、大島基彦、青山和正、更屋敦則、長谷川嘉則、白石友一、千葉健一、田中洋子、川尻-真子千華、大島-長谷川渚、塚本祥吉、酒井紫緒、竹田勇輔、大和田千桂子、武内正博、堺田惠美子、井関徹、三澤園子、宮野悟、小原收、横手幸太郎、桑原聡、真田昌、岩間厚志、小川誠司、中世古知昭
  • 学会等名: 日本血液学会学術集会
• [学会発表] 新規部位特異的組み換え酵素システムVCre/VloxPシステムとSCre/SloxPシステムを利用した哺乳類細胞における高効率遺伝子カセット挿入法 (2015)
  • 著者名/発表者名: 長谷川嘉則、渡辺貴志、池野正史、小原収、中山学
  • 学会等名: 第38回日本分子生物学会年会、第88回日本生化学会大会 合同大会
  • 発表場所: 神戸ポートアイランド
  • 年月日: 2015-12-03