遺伝子改変カニクイザルES・iPS細胞を駆使した新型多能性幹細胞株の樹立

• 研究課題/領域番号: 15K21080
• 研究種目: 若手研究(B)
• 配分区分: 基金
• 研究分野: 統合動物科学; 医化学一般
• 研究機関: 滋賀医科大学
• 研究代表者: 築山 智之 滋賀医科大学, 動物生命科学研究センター, 助教 (60612132)
• 研究期間 (年度): 2015-04-01 – 2017-03-31
• 研究課題ステータス: 完了 (2016年度)
• 配分額: 4,160千円 (直接経費: 3,200千円、間接経費: 960千円); 2016年度: 2,080千円 (直接経費: 1,600千円、間接経費: 480千円); 2015年度: 2,080千円 (直接経費: 1,600千円、間接経費: 480千円)
• キーワード: iPS細胞 / ES細胞 / カニクイザル / トランスジェニック動物 / ナイーブ化 / ゲノム編集 / CRISPR/Cas9

研究成果の概要

非ヒト霊長類における遺伝子改変技術は、疾患モデル動物の作製や前臨床試験に非常に有用であると考えられるが、依然として報告例は少ない。本研究では、カニクイザルをヒトのモデル動物として用い、遺伝子改変個体および多能性幹細胞の効率的作出を試みた。
本研究では、レンチウイルスベクター法により、全身でGFPを発現するトランスジェニックカニクイザル個体を得ることに世界で初めて成功した。また、CRISPR/Cas9システムを駆使したレポーターシステムを応用することによって、高品質な非齧歯類ES・iPS細胞の樹立に繋げる基盤技術を確立した。
これらの基盤技術は将来的に医療産業の振興に発展するものと期待される。

研究成果

• [雑誌論文] Flexible adaptation of male germ cells from female iPS cells of endangered Tokudaia osimensis (2017)
  • 著者名/発表者名: Honda A., Choijookhuu N., Izu H., Kawano Y., Inokuchi M., Honsho K., Lee A., Nabekura H., Ohta H., Tsukiyama T., Ohinata Y., Kuroiwa A., Hishikawa Y., Saitou M., Jogahara T., Koshimoto C.
  • 雑誌名: Science Advances 巻: 印刷中
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Derivation of Induced Trophoblast Cell Lines in Cattle by Doxycycline-Inducible piggyBac Vectors (2016)
  • 著者名/発表者名: Kawaguchi T, Cho D, Hayashi M, Tsukiyama T, Kimura K, Matsuyama S, Minami N, Yamada M and Imai H
  • 雑誌名: PloS One 巻: 11 号: 12 ページ: 1-15
  • DOI: 10.1371/journal.pone.0167550
  • NAID: 120005980901
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Visualization of the Epiblast 1 and Visceral Endodermal Cells using Fgf5-P2A-Venus BAC Transgenic Mice and Epiblast Stem Cells (2016)
  • 著者名/発表者名: Khoa LTP, Azami T, Tsukiyama T, Matsushita J, Tsukiyama-Fujii S, Takahashi S, Ema M.
  • 雑誌名: PLoS One. 巻: 16(1) 号: 7 ページ: 310-310
  • DOI: 10.1371/journal.pone.0159246
  • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著
• [雑誌論文] Generation of transgenic cynomolgus monkeys that express green fluorescent protein throughout the whole body (2016)
  • 著者名/発表者名: Seita Y, Tsukiyama T, Iwatani C, Tsuchiya H, Matsushita J, Azami T, Okahara J, Nakamura S, Hayashi Y, Hitoshi S, Itoh Y, Imamura T, Nishimura M, Tooyama I, Miyoshi H, Saitou M, Ogasawara K, Sasaki E, Ema M
  • 雑誌名: Scientific Reports 巻: 2 号: 1 ページ: 24868-24868
  • DOI: 10.1038/srep24868
  • NAID: 130007023590
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Generation of naive bovine induced pluripotent stem cells using piggyBac transposition of doxycycline-inducible transcription factors (2015)
  • 著者名/発表者名: Kawaguchi T., Tsukiyama T., Kimura K., Matsuyama S., Minami N., Yamada M. and Imai H.
  • 雑誌名: PLoS ONE 巻: 10 号: 8 ページ: e0135403-e0135403
  • DOI: 10.1371/journal.pone.0135403
  • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著 / 謝辞記載あり
• [学会発表] 全身でGFPを発現するトランスジェニックカニクイザルの作製 (2016)
  • 著者名/発表者名: 清田 弥寿成、築山 智之、岩谷 千鶴、松下 淳、土屋 英明、浅見 拓哉、佐々木 えりか、依馬 正次
  • 学会等名: 日本分子生物学会
  • 発表場所: パシフィコ横浜
  • 年月日: 2016-11-30
• [学会発表] 全身でGFPを発現するトランスジェニックカニクイザルの作製 (2016)
  • 著者名/発表者名: 清田 弥寿成、築山 智之、岩谷 千鶴、松下 淳、土屋 英明、佐々木 えりか、依馬 正次
  • 学会等名: 日本繁殖生物学会
  • 発表場所: 麻布大学
  • 年月日: 2016-09-12
• [学会発表] Generation of GFP transgenic cynomolgus monkeys (2016)
  • 著者名/発表者名: Seita Y., Tsukiyama T., Iwatani C., Tsuchiya H., Matsushita J., Azami T., Ogasawara K. and Ema M.
  • 学会等名: SRF Annual Conference 2016
  • 発表場所: University of Winchester
  • 年月日: 2016-07-11
  • 国際学会
• [学会発表] マウスおよびカニクイザル多能性幹細胞におけるCRISPR/Cas9を用いた発現増幅型多能性幹細胞レポーターのノックイン (2015)
  • 著者名/発表者名: 築山 智之、丹羽 仁史、岩谷 千鶴、土屋 英明、清田 弥寿成、松下 淳、依馬 正次
  • 学会等名: 日本繁殖生物学会
  • 発表場所: 宮崎大学
  • 年月日: 2015-09-19
• [図書] 実験医学別冊 マウス表現型解析スタンダード (2016)
  • 著者名/発表者名: 築山 智之、依馬 正次
  • 総ページ数: 347
  • 出版者: 羊土社
• [備考] 国立大学法人 滋賀医科大学 動物生命科学研究センター 幹細胞・ヒト疾患モデル研究分野
  • URL: http://lab.rcals.jp/