関節リウマチ特異的な免疫複合体のエピトープの精密特定と複合体形成制御薬の基礎開発

• 研究課題/領域番号: 16H05344
• 研究種目: 基盤研究(B)
• 配分区分: 補助金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 膠原病・アレルギー内科学
• 研究機関: 長崎大学
• 研究代表者: 大山 要 長崎大学, 医歯薬学総合研究科(薬学系), 准教授 (50437860)
• 研究分担者: 稲嶺 達夫 長崎大学, 医歯薬学総合研究科(薬学系), 准教授 (00549628) ; 一瀬 邦弘 長崎大学, 医歯薬学総合研究科(医学系), 講師 (60437895) ; 岸川 直哉 長崎大学, 医歯薬学総合研究科(薬学系), 准教授 (90336181)
• 研究期間 (年度): 2016-04-01 – 2019-03-31
• 研究課題ステータス: 完了 (2018年度)
• 配分額: 17,420千円 (直接経費: 13,400千円、間接経費: 4,020千円); 2018年度: 1,430千円 (直接経費: 1,100千円、間接経費: 330千円); 2017年度: 6,890千円 (直接経費: 5,300千円、間接経費: 1,590千円); 2016年度: 9,100千円 (直接経費: 7,000千円、間接経費: 2,100千円)
• キーワード: 免疫複合体 / 関節リウマチ / リウマチ学

研究成果の概要

免疫複合体抗原のエピトープ特定のため、免疫複合体から抗原のみを選択的に溶出する条件として、低pH溶出液で抗原を抗体から解離させ溶出する方法と、PapainでFabと抗原を溶出する方法を比較した。その結果、Papain溶出法が選択的に免疫複合体抗原を溶出できることがわかった。そして、エピトープ以外を免疫複合体から切り出すための酵素消化の検討を行った結果、トリプシンとLys-Cを用いた二段階消化が適していることがわかった。本研究で確立した条件・手順をもとに実際の患者検体からTSP-1免疫複合体を回収し、内標準を参考に関節リウマチでのエピトープの精密特定を進めている。

研究成果の学術的意義や社会的意義

本研究は関節リウマチでおきる異常な免疫反応の根本原因と考えられるタンパク質の異常部位（エピトープ）を全く新しい方法で決定することを目指している。具体的には、患者体内でできる免疫複合体（異常なタンパク質と抗体が結合したもの）を直接調べて、エピトープを特定する。このエピトープを特定できれば、病気の根治だけでなく、従来の免疫抑制療法で危惧される感染症のリスクを回避する治療法の開発につながる可能性がある。
今回の成果で、免疫複合体に含まれる異常なタンパク質のエピトープを特定するための解析条件を決めることができた。今後は、実際の患者の体内にある免疫複合体を使って、病気の原因となるエピトープの特定を進める。

研究成果

• [国際共同研究] Saint Louis University/School of Medicine(米国)
• [雑誌論文] Selective, sensitive and comprehensive detection of immune complex antigens by immune complexome analysis with papain-digestion and elution (2019)
  • 著者名/発表者名: Aibara N, Kamohara C, Chauhan AK, Kishikawa N, Miyata Y, Nakashima M, Kuroda N, Ohyama K
  • 雑誌名: Journal of Immunological Methods 巻: 461 ページ: 85-90
  • DOI: 10.1016/j.jim.2018.06.021
  • 査読あり / 国際共著
• [雑誌論文] Proteomic approach to profiling immune complex antigens in cerebrospinal fluid samples from patients with central nervous system autoimmune diseases. (2018)
  • 著者名/発表者名: Aibara N, Ichinose K, Baba M, Nakajima H, Satoh K, Atarashi R, Kishikawa N, Nishida N, Kawakami A, Kuroda N, Ohyama K
  • 雑誌名: Clin Chim Acta 巻: 484 ページ: 26-31
  • DOI: 10.1016/j.cca.2018.05.026
  • 査読あり
• [雑誌論文] Immune complexome analysis of antigens in circulating immune complexes from patients with acute cellular rejection after living donor liver transplantation. (2018)
  • 著者名/発表者名: Aibara N, Ohyama K, Hidaka M, Kishikawa N, Miyata Y, Takatsuki M, Eguchi S, Kuroda N.
  • 雑誌名: Transplant Immunology 巻: 3274 ページ: 30143-0
  • DOI: 10.1016/j.trim.2018.02.011
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Novel anti-suprabasin antibodies may contribute to the pathogenesis of neuropsychiatric systemic lupus erythematosus. (2018)
  • 著者名/発表者名: Ichinose K, Ohyama K, Furukawa K, Higuchi O, Mukaino A, Satoh K, Nakane S, Shimizu T, Umeda M, Fukui S, Nishino A, Nakajima H, Koga T, Kawashiri SY, Iwamoto N, Tamai M, Nakamura H, Origuchi T, Yoshida M, Kuroda N, Kawakami A.
  • 雑誌名: Clin Immunol. 巻: 印刷中 ページ: 123-130
  • DOI: 10.1016/j.clim.2017.11.006
  • 査読あり / 国際共著
• [雑誌論文] Immune complexome analysis reveals specific and frequent presence of immune complex antigens in lung cancer patients: A pilot study. (2017)
  • 著者名/発表者名: K. Ohyama, H. Yoshimi, N. Aibara, Y. Nakamura, Y. Miyata, H. Sakai, F. Fujita, Y. Imaizumi, A.K. Chauhan, N. Kishikawa, N. Kuroda
  • 雑誌名: International Journal of Cancer 巻: 140 号: 2 ページ: 370-380
  • DOI: 10.1002/ijc.30455
  • 査読あり / 国際共著 / 謝辞記載あり
• [学会発表] 臨床系教員が薬学の強みを意識して考える医師・薬剤師との共同研究 (2019)
  • 著者名/発表者名: 大山 要
  • 学会等名: 日本薬学会第139年会
• [学会発表] 強みを生かせばできる！基礎-臨床双方向の研究展開 (2018)
  • 著者名/発表者名: 大山 要
  • 学会等名: 日本薬学会第138年会
  • 招待講演
• [学会発表] イムノコンプレキソーム解析法における免疫複合体抗原選択的な溶出法の検討 (2018)
  • 著者名/発表者名: 相原希美，蒲原千裕，Anil Chauhan，岸川直哉，中嶋幹郎，黒田直敬，大山 要
  • 学会等名: 日本薬学会第138年会
• [学会発表] 肝臓移植患者の血清中免疫複合体の網羅的解析 (2016)
  • 著者名/発表者名: 相原希美、大山 要、日高匡章、岸川直哉、黒田直敬
  • 学会等名: 第41回日本医用マススペクトル学会年会
  • 発表場所: 愛知県産業労働センター（愛知県・名古屋市）
  • 年月日: 2016-09-15
• [図書] Immunoproteomics: Methods and Protocols, Second Edition (Methods in Molecular Biology) (2019)
  • 著者名/発表者名: N. Aibara, K. Ohyama
  • 出版者: Springer