RNA編集酵素ADAR1ノックアウトマウスによるワクチン開発の基盤確立

• 研究課題/領域番号: 16K07082
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 配分区分: 基金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 実験動物学
• 研究機関: 千葉大学
• 研究代表者: 谷口 俊文 千葉大学, 医学部附属病院, 講師 (20724826)
• 研究分担者: 有馬 雅史 獨協医科大学, 医学部, 准教授 (00202763) ; 幡野 雅彦 千葉大学, 大学院医学研究院, 教授 (20208523)
• 研究期間 (年度): 2016-10-21 – 2020-03-31
• 研究課題ステータス: 交付 (2018年度)
• 配分額: 4,940千円 (直接経費: 3,800千円、間接経費: 1,140千円); 2018年度: 1,820千円 (直接経費: 1,400千円、間接経費: 420千円); 2017年度: 1,560千円 (直接経費: 1,200千円、間接経費: 360千円); 2016年度: 1,560千円 (直接経費: 1,200千円、間接経費: 360千円)
• キーワード: 免疫応答 / 疾患モデル

研究実績の概要

濾胞性ヘルパーT細胞(follicular helper T; Tfh)細胞は胚中心形成および活性化B細胞を高親和性IgG抗体産生細胞へ分化させるために必須であることが明らかにされている。転写抑制因子であるBcl6は胚中心B細胞の必須分化因子であり、T細胞においてはTfh細胞分化を誘導するマスター因子である。ADAR1(adenosine deaminase acting on RNA-1)はBcl6の標的遺伝子であることを見出しており本研究ではTfh細胞の分化誘導におけるADAR1の機能の解明している。

平成30年度はCD28のノックアウトマウスとCD45.1マウスとの掛け合わせを行い、このマウスに対してOX40で切断したADAR1ノックスとマウスのトランスファーによるin vivoの実験を行った。ADAR1のOX40-Creによるコンディショナルノックアウトマウスおよび野生型マウスからナイーブT細胞を脾臓からソートして取り出し、CD28ノックアウトマウスとCD45.1マウスとの掛け合わせたマウスにトランスファーした後にDNP-OVAによる免疫を行った。胚中心が形成される時期にあわせ、経時的に脾臓におけるTfh細胞およびGC-Tfh細胞（GL7+）についてFACS解析を行った。また免疫後、経時的に採血して血中IgMやIgG1抗NP抗体価を親和性とともにELISA法で測定した。また免疫後上記マウスの脾臓由来のTfh細胞とGC-Tfh細胞をセルソータで分取した後、各細胞について、Tfh細胞で発現している遺伝子群の発現をリアルタイムRT-PCR法で解析した。現在は実験結果を解析中である。

現在までの達成度 (区分)

2: おおむね順調に進展している

理由

平成30年4月から平成31年3月までの予定されていた研究計画はおおむね順調である。実験基盤の整備から、Tfh細胞の分化誘導におけるADAR1の機能解明のために
行ったin vitroの実験の成果をもとに、コンディショナルノックアウトマウスにおける免疫応答の実験を行い、さらなる成果をあげることができた。in vivoによる実験を予定していたが、Ragノックアウトマウスの入手ができず、代替としてCD28ノックアウトマウスへのトランスファーの実験方法を確立した。これに関しては実験が終了しており、現在は解析及び必要に応じて追加実験を行っている。

今後の研究の推進方策

ノックアウトマウスの脾細胞をトランスファーするin vivoの実験を行ったので、その解析を進める。また同様の手法を用いてソートしてきたGC-Tfh細胞を用いてADAR1の標的RNA探索のための基盤的解析を予定通り進める予定である。

研究成果

• [雑誌論文] Various associations of aging and long-term HIV infection with different neurocognitive functions: detailed analysis of a Japanese nationwide multicenter study (2019)
  • 著者名/発表者名: Komatsu Kensuke、for The HIV-Associated Neurocognitive Disorders in Japanese (J-HAND) Study Group (The J-HAND Study Group)、Kinai Ei、Sakamoto Maiko、Taniguchi Toshibumi、Nakao Aya、Sakata Tatsuro、Iizuka Akiko、Koyama Teppei、Ogata Toki、Inui Akihiro、Oka Shinichi
  • 雑誌名: Journal of NeuroVirology 巻: in press
  • DOI: 10.1007/s13365-018-0704-7
  • 査読あり
• [雑誌論文] Adverse Events after the Introduction of Quadrivalent Influenza Vaccine in Comparison with AH1pdm Vaccine (2009) in Japan (2019)
  • 著者名/発表者名: Yamazaki Shingo、Fujiwara Mariko、Inoue Chikako、Watanabe Masaharu、Takayanagi Shin、Taniguchi Toshibumi、Watanabe Akira、Ishiwada Naruhiko、Igari Hidetoshi
  • 雑誌名: 薬学雑誌 巻: 139 号: 3 ページ: 469-474
  • DOI: 10.1248/yakushi.18-00160
  • NAID: 130007606867
  • ISSN: 0031-6903, 1347-5231
  • 査読あり
• [雑誌論文] 特集 プロブレムから学ぶ感染症診療-すぐに役立つ厳選シナリオ30選 発熱＋αの症状から診断する 発熱と腰痛 (2018)
  • 著者名/発表者名: 谷口 俊文
  • 雑誌名: medicina 巻: 55 号: 6 ページ: 780-783
  • DOI: 10.11477/mf.1402225609
  • ISSN: 0025-7699, 1882-1189
• [雑誌論文] テノホビルの血中濃度モニタリングにより血液透析導入HIV感染者へのツルバダ配合錠至適用量を検討した2症例 (2018)
  • 著者名/発表者名: 築地 茉莉子, 山崎 伸吾, 谷口 俊文, 中村 貴子, 鈴木 貴明, 猪狩 英俊, 石井 伊都子
  • 雑誌名: 日本エイズ学会誌 巻: 20 ページ: 132-137
• [雑誌論文] TH2 response governed by Bcl6 function in naturally occurring memory phenotype CD4+ T cells. (2018)
  • 著者名/発表者名: Takashi Ogasawara,Yuko Kohashi,Jun Ikari,Toshibumi Taniguchi,Nobuhide Tsuruoka,Haruko Watanabe-Takano,Lisa Fujimura,Akemi Sakamoto,Masahiko Hatano,Hirokuni Hirata,Yasutsugu Fukushima,Takeshi Fukuda,Kazuhiro Kurasawa,Koichiro Tatsumi,Takeshi Tokuhisa,Masafumi Arima
  • 雑誌名: Front. Immunol. 巻: 9 ページ: 1-17
  • DOI: 10.3389/fimmu.2018.00750
  • 査読あり / オープンアクセスとしている
• [雑誌論文] Development of chronic allergic responses by dampening Bcl6-mediated suppressor activity in memory T helper 2 cells (2017)
  • 著者名/発表者名: Ogasawara T, Hatano M, Satake H, Ikari J, Taniguchi T, Tsuruoka N, Watanabe-Takano H, Fujimura L, Sakamoto A, Hirata H, Sugiyama K, Fukushima Y, Nakae S, Matsumoto K, Saito H, Fukuda T, Kurasawa K, Tatsumi K, Tokuhisa T, Arima M.
  • 雑誌名: Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America 巻: 114
  • DOI: 10.1073/pnas.1613528114
  • 査読あり / オープンアクセスとしている / 国際共著/国際学会である / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Association of age and time of disease with HIV-associated neurocognitive disorders: a Japanese nationwide multicenter study (2017)
  • 著者名/発表者名: Kinai Ei、for HIV-Associated Neurocognitive Disorders in Japanese (J-HAND study group)、Komatsu Kensuke、Sakamoto Maiko、Taniguchi Toshibumi、Nakao Aya、Igari Hidetoshi、Takada Kiyonori、Watanabe Aki、Takahashi-Nakazato Ai、Takano Misao、Kikuchi Yoshimi、Oka Shinichi
  • 雑誌名: Journal of Neurovirology 巻: 23 ページ: 864-874
  • DOI: 10.1007/s13365-017-0580-6
  • 査読あり
• [雑誌論文] Quality control in QuantiFERON-TB gold in-tube for screening latent tuberculosis infection in health care workers (2017)
  • 著者名/発表者名: Igari H, Watanabe A, Ichimura Y, Sakurai T, Taniguchi T, Ishiwada N.
  • 雑誌名: Journal of Infection and Chemotherapy: Official Journal of the Japan Society of Chemotherapy 巻: 23 ページ: 211-213
  • DOI: 10.1016/j.jiac.2016.12.006
  • 査読あり
• [雑誌論文] Clinical and bacteriological analyses of bacteremia due to Corynebacterium striatum. (2016)
  • 著者名/発表者名: Ishiwada N, Watanabe M, Murata S, Takeuchi N, Taniguchi T, Igari H.
  • 雑誌名: Journal of infection and chemotherapy 巻: 22 ページ: 790-793
  • DOI: 10.1016/j.jiac.2016.08.009
  • 査読あり
• [雑誌論文] 【糖尿病フットケアの実際と可能性-チーム医療と集学的治療-】 糖尿病における足感染の治療 (2016)
  • 著者名/発表者名: 谷口俊文
  • 雑誌名: プラクティス 巻: 33 ページ: 307-312
• [学会発表] ナショナルデータベースサンプルデータを用いた抗菌薬使用状況の疫学調査 (2018)
  • 著者名/発表者名: 山岸 一貴, 渡辺 正治, 高柳 晋, 櫻井 隆之, 谷口 俊文, 猪狩 英俊, 山崎 伸吾
  • 学会等名: 第92回日本感染症学会総会
• [学会発表] ナショナルデータベースによる外来抗菌薬使用状況の疫学調査 (2018)
  • 著者名/発表者名: 谷口 俊文, 山岸 一貴, 高柳 晋, 櫻井 隆之, 猪狩 英俊
  • 学会等名: 第92回日本感染症学会総会
• [学会発表] HIV感染症における保険薬局との病薬連携に関する検討 千葉県内の保険薬局を対象とした実態調査 (2018)
  • 著者名/発表者名: 渡部 智貴, 築地 茉莉子, 谷口 俊文, 金田 暁, 猪狩 英俊
  • 学会等名: 第32回日本エイズ学会学術集会・総会
• [学会発表] カンジダ血症におけるフォローアップ血液培養の提出率 (2017)
  • 著者名/発表者名: 谷口俊文、櫻井隆之、市村康典、猪狩英俊
  • 学会等名: 第９１回日本感染症学会総会・学術講演会
  • 発表場所: 京王プラザホテル（東京都・新宿区）
  • 年月日: 2017-04-06
• [学会発表] データウェアハウスの二次利用による敗血症治療成績の検討 (2017)
  • 著者名/発表者名: 猪狩英俊、市村康典、櫻井隆之、谷口俊文、渡辺正治
  • 学会等名: 第９１回日本感染症学会総会・学術講演会
  • 発表場所: 京王プラザホテル（東京都・新宿区）
  • 年月日: 2017-04-06
• [学会発表] 黄色ブドウ球菌菌血症におけるフォローアップ血液培養の提出率 (2017)
  • 著者名/発表者名: 谷口俊文、渡邊正治、櫻井隆之、山崎伸吾、藤原満里子、猪狩英俊
  • 学会等名: 第３２回日本環境感染学会総会・学術集会
  • 発表場所: 神戸国際展示場（兵庫県・神戸市）
  • 年月日: 2017-02-24
• [学会発表] 千葉大学病院におけるカルバペネム耐性腸内細菌科細菌のアウトブレイク対応とその効果 (2017)
  • 著者名/発表者名: 藤原満里子、谷口俊文、山崎伸吾、渡邊正治、櫻井隆之、市村康典、猪狩英俊
  • 学会等名: 第３２回日本環境感染学会総会・学術集会
  • 発表場所: 神戸国際展示場（兵庫県・神戸市）
  • 年月日: 2017-02-24
• [学会発表] 抗菌薬適正使用ラウンド介入率がAntimicrobial Use Density およびDays of Therapy に与える影響 (2017)
  • 著者名/発表者名: 山崎伸吾、藤原満里子、猪狩英俊、渡邊正治、谷口俊文、市村康典、櫻井隆之、高塚博一
  • 学会等名: 第３２回日本環境感染学会総会・学術集会
  • 発表場所: 神戸国際展示場（兵庫県・神戸市）
  • 年月日: 2017-02-24
• [学会発表] 新採用医療従事者の4 種（麻疹・風疹・水痘・ムンプス）ワクチン接種歴書面報告と抗体価測定結果 (2017)
  • 著者名/発表者名: 猪狩英俊、藤原満里子、山崎伸吾、渡邊正治、市村康典、櫻井隆之、谷口俊文、石和田稔彦
  • 学会等名: 第３２回日本環境感染学会総会・学術集会
  • 発表場所: 神戸国際展示場（兵庫県・神戸市）
  • 年月日: 2017-02-24
• [学会発表] 若年HIV感染者の骨密度低下に関連するリスク因子の検討 (2017)
  • 著者名/発表者名: 谷口俊文, 築地茉莉子, 櫻井隆之, 猪狩英俊
  • 学会等名: 日本エイズ学会
• [学会発表] 千葉県臨床検査技師会が行っている休日街頭HIV抗体検査の実施状況について (2017)
  • 著者名/発表者名: 布施 義也, 谷口俊文, 中山茂, 綿引一成, 吉田隆, 東和彦, 小野寺清隆, 大野光江, 三末高央, 小川優, 下条小百合, 小林健, 坂本浩輝
  • 学会等名: 日本エイズ学会
• [学会発表] HIV感染者の服薬アドヒアランスに影響を与える因子の検討 (2017)
  • 著者名/発表者名: 築地茉莉子, 谷口俊文, 櫻井隆之, 中村貴子, 鈴木貴明, 猪狩英俊, 石井伊都子
  • 学会等名: 日本エイズ学会
• [学会発表] HIV関連神経認知障害(HAND)と精神疾患や薬物使用との関連(J-HAND研究)(第3報) (2017)
  • 著者名/発表者名: 木内英, 小松賢亮, 坂本麻衣子, 谷口俊文, 中尾綾, 猪狩英俊, 渡邊愛祈, 高野操, 菊池嘉, 岡慎一
  • 学会等名: 日本エイズ学会
• [学会発表] HIV関連神経認知障害(HAND)における神経心理検査別の関連因子に関する検討(J-HAND研究)(第2報) (2017)
  • 著者名/発表者名: 小松賢亮, 木内英, 坂本麻衣子, 谷口俊文, 中尾綾, 坂田達朗, 飯塚暁子, 小山徹平, 緒方釈, 乾啓洋, 岡慎一, J-HAND StudyGroup
  • 学会等名: 日本エイズ学会
• [学会発表] 長期療養時代を迎えたHIV感染症の課題と展望 (2016)
  • 著者名/発表者名: 谷口俊文
  • 学会等名: 第65回日本感染症学会東日本地方会学術集会
  • 発表場所: 新潟コンベンションセンター（新潟県・新潟市）
  • 年月日: 2016-10-26
  • 招待講演