膜内切断RIPの分子機構解明に向けた膜内プロテアーゼRsePの立体構造解析

• 研究課題/領域番号: 19687004
• 研究種目: 若手研究(A)
• 配分区分: 補助金
• 研究分野: 構造生物化学
• 研究機関: 大阪大学
• 研究代表者: 禾 晃和 大阪大学, 蛋白質研究所, 助教 (40379102)
• 研究期間 (年度): 2007 – 2009
• 研究課題ステータス: 完了 (2009年度)
• 配分額: 25,870千円 (直接経費: 19,900千円、間接経費: 5,970千円); 2009年度: 4,160千円 (直接経費: 3,200千円、間接経費: 960千円); 2008年度: 5,720千円 (直接経費: 4,400千円、間接経費: 1,320千円); 2007年度: 15,990千円 (直接経費: 12,300千円、間接経費: 3,690千円)
• キーワード: 構造生物学 / 蛋白質 / シグナル伝達 / 立体構造解析 / 膜蛋白質 / プロテアーゼ / 結晶化 / 組み換え蛋白質の大量発現 / 膜内蛋白質切断

研究概要

本研究では、膜内蛋白質切断という特殊な加水分解反応が如何なる作用機序によって行われているかを明らかにすべく、大腸菌由来の膜内プロテアーゼRsePを取り上げ、立体構造解析および生化学的解析を進めた。結晶化に向けた全長膜蛋白質の調製に関しては、細菌由来のオルソログの一つが高純度でかつ安定な状態で精製できることを見出し、また機能解析に関しては、ペリプラズム側に存在する可溶性領域が切断に関与していることも明らかにすることが出来た。

研究成果

• [雑誌論文] Novel affinity tag system using structurally defined antibody-tag interaction: Application to single-step protein purification (2008)
  • 著者名/発表者名: 禾晃和, 寒川剛, 田畑早苗, 長江雅倫, 川上恵子, 別府亜耶子, 服部光治, 安井典久, 高木淳一
  • 雑誌名: Protein Science Vol.17 ページ: 2120-2126
  • 査読あり
• [雑誌論文] A murine monoclonal antibody that binds N-terminal extracellular segment of human protease activated receptor-4 (2008)
  • 著者名/発表者名: 寒川剛, 禾晃和, 高木淳一
  • 雑誌名: Hybridoma Vol.27 ページ: 331-335
  • 査読あり
• [学会発表] キメラ蛋白質を用いた膜内プロテアーゼの基質認識機構の解析 (2009)
  • 著者名/発表者名: 禾晃和, 高木淳一
  • 学会等名: 第82回日本生化学会大会
  • 発表場所: 神戸国際会議場(兵庫県)
  • 年月日: 2009-10-22
• [学会発表] 細菌型site-2 proteaseの基質認識におけるPDZドメインの役割 (2009)
  • 著者名/発表者名: 禾晃和, 高木淳一
  • 学会等名: 蛋白研セミナー「膜蛋白質の機能発現メカニズムの解明に向けて-細胞膜上での事象の解析-」
  • 発表場所: 大阪大学蛋白質研究所(大阪府)
  • 年月日: 2009-09-24
• [学会発表] 細菌型site-2 proteaseの基質認識におけるPDZドメインの役割 (2009)
  • 著者名/発表者名: 禾晃和
  • 学会等名: 蛋白研セミナー「膜蛋白質の機能発現メカニズムの解明に向けて -細胞膜上での事象の解析-」
  • 発表場所: 大阪大学蛋白質研究所(大阪府)
  • 年月日: 2009-09-24
• [学会発表] Structural analysis of PDZ domains of bacterial intramembrane proteases (2009)
  • 著者名/発表者名: 禾晃和, 高木淳一
  • 学会等名: American Crystallographic Association Annual Meeting Toronto 2009
  • 発表場所: Sheraton City Centre Hotel(カナダ、トロント市)
  • 年月日: 2009-07-28
• [学会発表] Structural analysis of PDZ domains of bacterial intramembrane proteases (2009)
  • 著者名/発表者名: 禾晃和
  • 学会等名: American Crystallographic Association, Annual Meeting Toronto 2009
  • 発表場所: Sheraton City Centre Hotel(カナダ、トロント市)
  • 年月日: 2009-07-28
• [学会発表] ドメインスワッピング変異体を用いた膜内プロテアーゼの基質認識機構の解析 (2009)
  • 著者名/発表者名: 禾晃和, 高木淳一
  • 学会等名: 第9回日本蛋白質科学会年会
  • 発表場所: 熊本全日空ホテル(熊本県)
  • 年月日: 2009-05-21
• [学会発表] Optimizing detergent-solubilization conditions for structural analysis of site-2 protease family proteins (2008)
  • 著者名/発表者名: 禾晃和, 高木淳一
  • 学会等名: Gordon Research Conference "Proteolytic Enzymes & Their Inhibitors"
  • 発表場所: コルビー=ソーヤー=カレッジ(米国・ニューハンプシャー州)
  • 年月日: 2008-07-07
• [学会発表] Optimizing detergent-solubilization conditions for structural analysis of site-2 protease family proteins (2008)
  • 著者名/発表者名: 禾晃和
  • 学会等名: Gordon Research ConferenceProteolytic enzymes & their inhibitors
  • 発表場所: Colby-Sawyer College(NH, USA)
• [学会発表] 抗GPCRモノクローナル抗体20.1を用いたアフィニティータグシステムの開発I-抗体策作成とエピトープ解析 (2007)
  • 著者名/発表者名: 寒川, 剛
  • 学会等名: 第7回日本蛋白質科学会年会
  • 発表場所: 仙台国際センター
  • 年月日: 2007-05-25
• [学会発表] 抗GPCRモノクローナル抗体20.1を用いたアフィニティータグシステムの開発II-Fabフラグメントの結晶構造解析 (2007)
  • 著者名/発表者名: 禾, 晃和
  • 学会等名: 第7回日本蛋白質科学会年会
  • 発表場所: 仙台国際センター
  • 年月日: 2007-05-25
• [学会発表] 抗GPCR抗体20.1を用いたアフィニティータグシステムの開発:(III 高親和性ぺプチド配列の探索 (2007)
  • 著者名/発表者名: 田畑, 早苗
  • 学会等名: 第7回日本蛋白質科学会年会
  • 発表場所: 仙台国際センター
  • 年月日: 2007-05-25
• [備考]
  • URL: http://www.protein.osaka-u.ac.jp/rcsfp/synthesis/