| 研究課題/領域番号 |
19K06450
|
|---|
| 研究種目 |
基盤研究(C)
|
| 配分区分 | 基金 |
|---|
| 応募区分 | 一般 |
|---|
| 審査区分 |
小区分42030:動物生命科学関連
|
|---|
| 研究機関 | 獨協医科大学 (2020-2023)
国立研究開発法人理化学研究所 (2019) |
|---|
研究代表者 |
佐藤 洋隆 獨協医科大学, 医学部, 助教 (00708539)
|
|---|
| 研究期間 (年度) |
2019-04-01 – 2024-03-31
|
| 研究課題ステータス |
完了 (2023年度)
|
| 配分額 *注記 |
4,290千円 (直接経費: 3,300千円、間接経費: 990千円)
2021年度: 1,690千円 (直接経費: 1,300千円、間接経費: 390千円)
2020年度: 1,040千円 (直接経費: 800千円、間接経費: 240千円)
2019年度: 1,560千円 (直接経費: 1,200千円、間接経費: 360千円)
|
|---|
| キーワード | BLV / 阻害剤 / 抗ウイルス薬 / 作用機序解析 / 膜融合阻害 / 低分子化合物 / 機序解明 / 牛白血病ウイルス / 薬剤スクリーニング / ウイルス感染阻害剤 / LuSIA / ウイルス / スクリーニング / 牛白血病 |
|---|
| 研究開始時の研究の概要 |
牛白血病ウイルス（BLV）は畜産界に大きな経済的損失を与え、食の安全性を脅かすことも示唆されているが、未だレセプターが同定されていないなど感染における不明な点が数多く残り、ワクチンや治療法も開発されていない。本研究では、これまでに同定した独自の構造を持つ5個のBLV感染阻害剤シード化合物から、リード化合物を創生し、標的分子への結合力を強めることで、その分子を同定し、BLV感染における機能を解明することを目的とする。そのために、リード化合物創生、作用点解析、化合物ビーズを用いたpull-down法とLC-MS/MSによる標的分子の同定、同定された標的分子の機能解析を行う。
|
| 研究実績の概要 |
本研究課題は平成29-30年度科研費若手(B)研究課題のスクリーニングによって独自に同定した牛伝染性リンパ腫ウイルス(BLV、旧：牛白血病ウイルス)の複製阻害能を有する、構造の異なる５種のシード化合物について、作用点と作用機序を明らかにすることによってBLV感染に寄与する新規因子を同定することを目的として行った。まず5腫の化合物の類縁構造をもつ化合物(計275化合物)についてスクリーニングを行い、3種類のBLV複製阻害活性をもつ化合物構造を決定し、高活性かつ細胞に低毒性のリード化合物(化合物A、B、C)を得ることに成功した。Time of addition assayの結果から、化合物Bは感染4時間以内の早期において感染を抑制していることが明らかになった。一方で化合物A、Cは、それ以降のステップに作用していることが示唆された。化合物Cは蛍光シンシチウム形成阻害実験においてシンシチウム構造形成よりも、ウイルス転写因子Taxによる緑色蛍光タンパク質発現を強く抑制したことから、化合物Cは侵入後から遺伝子転写までのステップに作用していることが示唆された。しかしながら化合物Cについてはロシアからの輸入ができず、合成も困難であることからこれ以上の解析は行わないこととした。化合物Aについても類縁体の構造相関が得られず、活性も安定しないことから以降は化合物Bについての解析を進めることとした。化合物Bはウイルス複製の遺伝子逆転写よりも前のステップで作用しており、本年度の膜融合阻害試験の結果から、ウイルスの細胞への膜融合のステップを阻害していることが明らかとなった。標的分子検出系の構築に時間を要したため、未だ標的因子の同定には至っていないが、現在は化合物の標識化と、それを用いたpull-down実験系の構築を進めている。
|
