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強力な直接遺伝学を駆使して微生物走性システムの全貌を見る

研究課題

研究課題/領域番号 19K06627
研究種目

基盤研究(C)

配分区分基金
応募区分一般
審査区分 小区分43060:システムゲノム科学関連
研究機関名古屋大学

研究代表者

井原 邦夫  名古屋大学, 遺伝子実験施設, 准教授 (90223297)

研究期間 (年度) 2019-04-01 – 2022-03-31
研究課題ステータス 完了 (2021年度)
配分額 *注記
4,290千円 (直接経費: 3,300千円、間接経費: 990千円)
2021年度: 910千円 (直接経費: 700千円、間接経費: 210千円)
2020年度: 1,040千円 (直接経費: 800千円、間接経費: 240千円)
2019年度: 2,340千円 (直接経費: 1,800千円、間接経費: 540千円)
キーワードゲノム / 古細菌 / システム解析 / 遺伝子 / ハイスループット / 変異 / 表現型 / 選択圧 / 高度好塩性古細菌 / ゲノム解析 / UV変異 / ゲノム多様性 / 化学変異原 / 光回復 / ゲノムシーケンス / 次世代ゲノムライブラリー作成 / 好塩性古細菌 / UV照射 / 突然変異 / 微生物 / 好アルカリ性古細菌 / 走性 / 次世代シーケンス / トランスポゼース / 磁気ビーズ / ハイスループット化 / 遺伝学 / システム
研究開始時の研究の概要

様々な生物のゲノムが大量に読まれる時代が到来した。しかし、ゲノム中の遺伝子 (ORF)の機能は分かっていないものが多く、ゲノムから生命を理解する際の大きな課題の1つとなっている。次世代シーケンサー(NGS)解析で強化された順方向遺伝学は、ゲノム中の遺伝子 (ORF) を生物機能システムの構成要素として理解する強力な手法である。このパワフルな順遺伝学を微生物の走性システムに適用し、システムに関係するORFを推定すると同時に、新規に得られる関連遺伝子数から、走性システムのサイズ(関係する遺伝子数)を見積もる手法を構築する。

研究成果の概要

目的達成のため、十分な変異数を持つランダム変異ライブラリーの構築を試みた。その過程において、これまで効率的に変異を導入できると考えられていたUV処理やEMS変異などの変異原処理が、生存率を極めて低くする処理条件においてもそれほど多数の変異が導入されるわけではないことを、大量ゲノム解析を行うことで確認した(UV変異導入の場合に最大で平均 0.5/ゲノム程度)。この低い変異導入率のままでも、なんらかのストレスをかけて選択することで、導入される変異数が増加することがわかった。また、1種類の微生物の1000株を超える大量ゲノム解析から、凍結保存株に潜在的なゲノム多様性が存在することを明らかにした。

研究成果の学術的意義や社会的意義

学術的には、これまで遺伝子変異導入に使われてきたUV変異による突然変異導入効率を、1000株程度のゲノム解析を行うことで決定し、高度好塩性好アルカリ性古細菌では、最大でも平均0.5個/ゲノム程度であることを決めたことと、凍結保存した株においてもかなりのゲノム多様性が存在することを明らかにしたことが、今後の知見として重要であると考える。社会的には、UVなどの変異原に対する生物の処理方法(完全に修復するか、さもなくば死ぬ)と修復能力の高さが強調でき、同時に、直接沢山の生物のゲノム解析を行うことでゲノム変異の種類や程度を調べることができる時代になったことが伝えられる点で意義深いと考えている。

報告書

(4件)
  • 2021 実績報告書   研究成果報告書 ( PDF )
  • 2020 実施状況報告書
  • 2019 実施状況報告書
  • 研究成果

    (22件)

すべて 2022 2021 2020 2019 2018

すべて 雑誌論文 (14件) (うち国際共著 5件、 査読あり 14件、 オープンアクセス 9件) 学会発表 (8件)

  • [雑誌論文] Mutations in the stator protein PomA affect switching of rotational direction in bacterial flagellar motor2022

    • 著者名/発表者名
      Terashima Hiroyuki、Hori Kiyoshiro、Ihara Kunio、Homma Michio、Kojima Seiji
    • 雑誌名

      Scientific Reports

      巻: 12 号: 1 ページ: 2979-2979

    • DOI

      10.1038/s41598-022-06947-5

    • 関連する報告書
      2021 実績報告書
    • 査読あり / オープンアクセス
  • [雑誌論文] Two substates in the O intermediate of the light-driven proton pump archaerhodopsin-22022

    • 著者名/発表者名
      Kouyama Tsutomu、Ihara Kunio
    • 雑誌名

      Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Biomembranes

      巻: 1864 号: 7 ページ: 183919-183919

    • DOI

      10.1016/j.bbamem.2022.183919

    • 関連する報告書
      2021 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Identification of <i>sur2</i> mutation affecting the lifespan of fission yeast2021

    • 著者名/発表者名
      Kurauchi Tatsuhiro、Matsui Kotaro、Shimasaki Takafumi、Ohtsuka Hokuto、Tsubouchi Satoshi、Ihara Kunio、Tani Motohiro、Aiba Hirofumi
    • 雑誌名

      FEMS Microbiology Letters

      巻: 368 号: 12

    • DOI

      10.1093/femsle/fnab070

    • NAID

      120007183219

    • 関連する報告書
      2021 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Identification of <i>ksg1</i> mutation showing long‐lived phenotype in fission yeast2021

    • 著者名/発表者名
      Matsui Kotaro、Okamoto Keisuke、Hasegawa Tomoka、Ohtsuka Hokuto、Shimasaki Takafumi、Ihara Kunio、Goto Yuhei、Aoki Kazuhiro、Aiba Hirofumi
    • 雑誌名

      Genes to Cells

      巻: 26 号: 12 ページ: 967-978

    • DOI

      10.1111/gtc.12897

    • 関連する報告書
      2021 実績報告書
    • 査読あり / オープンアクセス
  • [雑誌論文] A slight bending of an α-helix in FliM creates a counterclockwise-locked structure of the flagellar motor in <i>Vibrio</i>2021

    • 著者名/発表者名
      Takekawa Norihiro、Nishikino Tatsuro、Yamashita Toshiki、Hori Kiyoshiro、Onoue Yasuhiro、Ihara Kunio、Kojima Seiji、Homma Michio、Imada Katsumi
    • 雑誌名

      The Journal of Biochemistry

      巻: 170 号: 4 ページ: 531-538

    • DOI

      10.1093/jb/mvab074

    • 関連する報告書
      2021 実績報告書
    • 査読あり / オープンアクセス
  • [雑誌論文] Loss of cell wall integrity genes cpxA and mrcB causes flocculation in Escherichia coli2021

    • 著者名/発表者名
      Sugawara Keita、Toyoda Hayato、Kimura Mami、Hayasaka Shunsuke、Saito Hiromi、Kobayashi Hiroshi、Ihara Kunio、Ida Tomoaki、Akaike Takaaki、Ando Eiji、Hyodo Mamoru、Hayakawa Yoshihiro、Hamamoto Shin、Uozumi Nobuyuki
    • 雑誌名

      Biochemical Journal

      巻: 478 号: 1 ページ: 41-59

    • DOI

      10.1042/bcj20200723

    • 関連する報告書
      2020 実施状況報告書
    • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著
  • [雑誌論文] Presynaptic MAST kinase controls opposing postsynaptic responses to convey stimulus valence in Caenorhabditis elegans2020

    • 著者名/発表者名
      Nakano Shunji、Ikeda Muneki、Tsukada Yuki、Fei Xianfeng、Suzuki Takamasa、Niino Yusuke、Ahluwalia Rhea、Sano Ayana、Kondo Rumi、Ihara Kunio、Miyawaki Atsushi、Hashimoto Koichi、Higashiyama Tetsuya、Mori Ikue
    • 雑誌名

      Proceedings of the National Academy of Sciences

      巻: 117 号: 3 ページ: 1638-1647

    • DOI

      10.1073/pnas.1909240117

    • 関連する報告書
      2020 実施状況報告書
    • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著
  • [雑誌論文] Energetics and kinetics of substrate analog-coupled staphylococcal nuclease folding revealed by a statistical mechanical approach.2020

    • 著者名/発表者名
      Mizukami T, Furuzawa S, Itoh SG, Segawa S, Ikura T, Ihara K, Okumura H, Roder H, Maki K
    • 雑誌名

      Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America

      巻: 117 号: 33 ページ: 19953-19962

    • DOI

      10.1073/pnas.1914349117

    • 関連する報告書
      2020 実施状況報告書
    • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著
  • [雑誌論文] The role of ROC75 as a daytime component of the circadian oscillator in Chlamydomonas reinhardtii2020

    • 著者名/発表者名
      Matsuo Takuya, Iida Takahiro, Ohmura Ayumi, Gururaj Malavika, Kato Daisaku, Mutoh Risa, Ihara Kunio, Ishiura Masahiro
    • 雑誌名

      PLOS GENETICS

      巻: 16 号: 6 ページ: e1008814-e1008814

    • DOI

      10.1371/journal.pgen.1008814

    • 関連する報告書
      2020 実施状況報告書
    • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著
  • [雑誌論文] Haloarcula mannanilytica sp. nov., a galactomannan-degrading haloarchaeon isolated from commercial salt2020

    • 著者名/発表者名
      Enomoto Shigeaki, Shimane Yasuhiro, Ihara Kunio, Kamekura Masahiro, Itoh Takashi, Ohkuma Moriya, Takahashi--Ando Naoko, Fukushima Yasumasa, Yoshida Yasuhiko, Usami Ron, Takai Ken, Minegishi Hiroaki
    • 雑誌名

      INTERNATIONAL JOURNAL OF SYSTEMATIC AND EVOLUTIONARY MICROBIOLOGY

      巻: 70 号: 12 ページ: 6331-6337

    • DOI

      10.1099/ijsem.0.004535

    • 関連する報告書
      2020 実施状況報告書
    • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著
  • [雑誌論文] The mechanosensitive channel YbdG from Escherichia coli has a role in adaptation to osmotic up-shock.2019

    • 著者名/発表者名
      Shun Amemiya, Hayato Toyoda, Mami Kimura, Hiromi Saito, Hiroshi Kobayashi, Kunio Ihara 3 , Kiyoto Kamagata 4 , Ryuji Kawabata 5 , Setsu Kato, Yutaka Nakashimada, Tadaomi Furuta, Shin Hamamoto, Nobuyuki Uozumi
    • 雑誌名

      Journal of Biological Chemistry

      巻: 294 (33) 号: 33 ページ: 12281-12292

    • DOI

      10.1074/jbc.ra118.007340

    • 関連する報告書
      2019 実施状況報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Cholecystokinin induces crowing in chickens2019

    • 著者名/発表者名
      Shimmura T, Tamura M, Ohashi S, Sasaki A, Yamanaka T, Nakao N, Ihara K, Okamura S, Yoshimura T.
    • 雑誌名

      Sci Rep.

      巻: 9 号: 1 ページ: 3978-3978

    • DOI

      10.1038/s41598-019-40746-9

    • 関連する報告書
      2019 実施状況報告書
    • 査読あり / オープンアクセス
  • [雑誌論文] gas1 mutation extends chronological lifespan via Pmk1 and Sty1 MAPKs in Schizosaccharomyces pombe2019

    • 著者名/発表者名
      Imai Yuki、Shimasaki Takafumi、Enokimura Chihiro、Ohtsuka Hokuto、Tsubouchi Satoshi、Ihara Kunio、Aiba Hirofumi
    • 雑誌名

      Bioscience, Biotechnology, and Biochemistry

      巻: 84 号: 2 ページ: 330-337

    • DOI

      10.1080/09168451.2019.1676695

    • 関連する報告書
      2019 実施状況報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Obesity and mental health improvement following nutritional education focusing on gut microbiota composition in Japanese women: a randomised controlled trial2018

    • 著者名/発表者名
      Uemura Mayu、Hayashi Fumikazu、Ishioka Ken、Ihara Kunio、Yasuda Kazushi、Okazaki Kanako、Omata Junichi、Suzutani Tatsuo、Hirakawa Yoshihisa、Chiang Chifa、Aoyama Atsuko、Ohira Tetsuya
    • 雑誌名

      European Journal of Nutrition

      巻: 2018 号: 8 ページ: 1-12

    • DOI

      10.1007/s00394-018-1873-0

    • 関連する報告書
      2019 実施状況報告書
    • 査読あり
  • [学会発表] 大量ゲノム解析に基づいた UVC 光照射法による変異導入効率の評価2022

    • 著者名/発表者名
      松尾佳祐、上坂一馬、井原邦夫
    • 学会等名
      第16回日本ゲノム微生物学会
    • 関連する報告書
      2021 実績報告書
  • [学会発表] シアノバクテリア Leptolyngbya boryana の光合成依存的な窒素固定生育に関わる遺伝子群の探索2022

    • 著者名/発表者名
      馬場真里、上坂一馬、戸松 千映、山本 治樹 、井原 邦夫 、藤田祐一
    • 学会等名
      第16回日本ゲノム微生物学会
    • 関連する報告書
      2021 実績報告書
  • [学会発表] 上坂一馬, 馬場真里、 藤田祐一、 井原 邦夫2022

    • 著者名/発表者名
      Tn 挿入ライブラリからゲノム変異を網羅的に検出するワークフローの開発
    • 学会等名
      第16回日本ゲノム微生物学会
    • 関連する報告書
      2021 実績報告書
  • [学会発表] UVc照射によるゲノム変異導入は効果的な方法か?2021

    • 著者名/発表者名
      井原邦夫, 松尾佳祐、上坂一馬
    • 学会等名
      第59回日本生物物理学会
    • 関連する報告書
      2021 実績報告書
  • [学会発表] バクテリオロドプシンの光反応サイクルにおける2種類のO中間体の存在2021

    • 著者名/発表者名
      神山勉、井原邦夫
    • 学会等名
      第59回日本生物物理学会
    • 関連する報告書
      2021 実績報告書
  • [学会発表] 高度好塩性好アルカリ性古細菌 Natronomonas pharaonisを用いた大量変異導入と全ゲノムシーケンス解析の実験系の開発2021

    • 著者名/発表者名
      松尾佳祐、上坂一馬、井原邦夫
    • 学会等名
      第33回日本Archaea 研究会
    • 関連する報告書
      2021 実績報告書
  • [学会発表] ゲノムから見直す微生物分類の再考ーーーVibrio alginolyticusの場合ーーー2021

    • 著者名/発表者名
      上坂一馬,井原邦夫
    • 学会等名
      第15回 微生物ゲノム学会
    • 関連する報告書
      2020 実施状況報告書
  • [学会発表] 微生物ゲノムライブラリーを手軽で格安に作る -1コインゲノム解析を目指して2020

    • 著者名/発表者名
      井原邦夫、上坂一馬
    • 学会等名
      第14回 微生物ゲノム学会
    • 関連する報告書
      2019 実施状況報告書

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公開日: 2019-04-18   更新日: 2023-01-30  

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