研究課題/領域番号 |
19K09222
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研究種目 |
基盤研究(C)
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配分区分 | 基金 |
応募区分 | 一般 |
審査区分 |
小区分55020:消化器外科学関連
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研究機関 | 福島県立医科大学 |
研究代表者 |
丸橋 繁 福島県立医科大学, 医学部, 教授 (20362725)
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研究分担者 |
武藤 亮 福島県立医科大学, 医学部, 助手 (10791478)
鈴志野 聖子 福島県立医科大学, 医学部, 助手 (20816376)
石亀 輝英 福島県立医科大学, 医学部, 講師 (50583358)
清水 裕史 福島県立医科大学, 医学部, 講師 (70553709)
佐藤 直哉 福島県立医科大学, 医学部, 助教 (90622332)
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研究期間 (年度) |
2019-04-01 – 2024-03-31
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研究課題ステータス |
交付 (2022年度)
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配分額 *注記 |
4,290千円 (直接経費: 3,300千円、間接経費: 990千円)
2021年度: 1,300千円 (直接経費: 1,000千円、間接経費: 300千円)
2020年度: 1,170千円 (直接経費: 900千円、間接経費: 270千円)
2019年度: 1,820千円 (直接経費: 1,400千円、間接経費: 420千円)
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キーワード | 肝スフェロイド / 複合型肝細胞シート / 3D培養 / 肝組織 / 肝細胞スフェロイド / 肝細胞分離 / 肝細胞 / シート技術 / 肝再生 / スフェロイド / 細胞シート / リコンビナントペプチド |
研究開始時の研究の概要 |
正常肝組織からCTOS作成法を応用してLTOSsを分離し、①間葉系幹細胞シートあるいは②多孔性RCPとの複合共培養によって複合型LTOSsシートを作成する。得られたLTOSsシートにおける細胞間接着、シグナル伝達経路を解析し、肝組織再生における制御メカニズムの解明を行う。さらに、確立した複合型LTOSsシートを積層する技術を確立し、同様に形態、増殖再生能および機能評価を行い、最適化した複合型LTOSsシートを作成する。 作成した複合型LTOSsシートを免疫不全マウスに移植し生着、形態、増殖再生能および機能評価を行う。さらに、肝不全マウスモデルを作成し、LTOSsシート移植法を確立する。
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研究実績の概要 |
本研究では、細胞間接着を有した肝細胞スフェロイド;Liver tissue-originate spheroids (LTOSs)を用いた複合型肝細胞シート(LTOSsシート)の開発を行なっている。 2021年度から、当講座で行っている肝細胞分離の手法を応用してLTOSsを作製している。分離したLTOSsは、培養1日目よりViabilityの低下を認め、3日以上の培養は困難であった。 原因として、分離後にLTOSsに含まれる肝細胞のうち、ある一定の死細胞が存在することが、細胞活性を有する肝細胞にも悪影響を及ぼすものと考えられた。2022年度からは、LTOSsに接着している死細胞を減らすため、分離条件を検討した。分離時のフィルターを70μmから40μmに変更したところ、分離直後のViabilityは向上した。 また、スフェロイドの生存に必要なサイトカインがLTOsの培養においても重要な役割を担うと考え、肝細胞のGrowth factor(例えば、HGF、OSMなど)を培養に添加するし、より最適な培養条件を確立する実験を行っている。
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現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
本年度実施した実験では、Viabilityの高いスフェロイドを回収することを目的として、LTOSsの分離方法および培養条件の変更を行った。しかし、3D培養下でLTOSsのViabilityを十分に長く維持する最適条件を確立できていない。より最適な分離・培養条件を確立するために時間を要している。
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今後の研究の推進方策 |
LTOSs作製・培養の手法を最適化し、より高いViabilityを安定して維持できるLTOSsを得る。また、LTOSsに含まれる複数の細胞を免疫染色により識別し、合成されたタンパク質などの物質をELISA法で定量化して評価することで、成熟した肝組織としての機能を有するLTOSsであることを確認する。 安定したLTOSsの培養方法が確立した後は、免疫不全マウスの皮下、肝表面などに移植し、移植片の形態評価、機能評価を行なう。また、疾患モデルマウスへの移植も検討している。
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