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肝癌データベースに基づく早期肝癌特異的メチル化遺伝子の同定と機能解析

研究課題

研究課題/領域番号 20659208
研究種目

挑戦的萌芽研究

配分区分補助金
研究分野 消化器外科学
研究機関山口大学

研究代表者

岡 正朗  山口大学, 大学院・医学系研究科, 教授 (70144946)

研究分担者 飯塚 徳男  山口大学, 大学院・医学系研究科, 准教授 (80332807)
研究期間 (年度) 2008 – 2009
研究課題ステータス 完了 (2009年度)
配分額 *注記
3,200千円 (直接経費: 3,200千円)
2009年度: 1,300千円 (直接経費: 1,300千円)
2008年度: 1,900千円 (直接経費: 1,900千円)
キーワード肝癌 / メチル化遺伝子 / エピジェネティクス / CpGアイランド / 早期診断 / 定量的MSP / 網羅的解析
研究概要

早期肝細胞癌において高頻度にメチル化されることが明らかとなったBASP1及びSRD5A2遺伝子のDNAメチル化率をより簡便に高精度に測定するため、メチル化特異的PCR(MSP)の条件を確立した。単一のCpGアイランド内であってもDNAメチル化率に違いがあることを見出し、最適な測定箇所を選択し組み合わせることで、感度85%・特異度91%の検出能を発揮するに至った。
6種の肝癌細胞株における、BASP1及びSRD5A2遺伝子のmRNA発現レベルとDNAメチル化率の定量及び脱メチル化剤による発現誘導レベルの定量を行った。その結果、BASP1については、6細胞株中4つでDNAメチル化が認められ、その内の3つは脱メチル化剤によるmRNA発現の上昇も確認された。SRD5A2については、6細胞株中5つでDNAメチル化及び脱メチル化剤によるmRNA発現の上昇が確認された。両遺伝子のmRNA発現レベルとDNAメチル化率との間には逆相関も見られた。これらの結果から、BASP1及びSRD5A2はDNAメチル化によって発現制御されていることが示唆された。
細胞株に特異的siRNAを移入することによるノックダウン系を確立した。さらに、発現ベクターを構築し細胞株に導入することで、安定強制発現株をそれぞれ確立した。前述のノックダウン・強制発現系を用いて、細胞増殖能の評価と細胞周期解析を行った。しかしながら、SRD5A2強制発現による細胞増殖能の低下が見られた以外に、ノックダウン・強制発現系における有意な影響は見られなかった。浸潤・転移能力の評価については解析が完了しなかったので、今後行っていきたい。
本研究によって、BASP1及びSRD5A2遺伝子におけるDNAメチル化率をMSPによって測定することで、早期の肝細胞癌を特異的に検出することが可能となった。

報告書

(2件)
  • 2009 実績報告書
  • 2008 実績報告書
  • 研究成果

    (22件)

すべて 2010 2009 2008

すべて 雑誌論文 (8件) (うち査読あり 8件) 学会発表 (13件) 図書 (1件)

  • [雑誌論文] The assessment of methylated BASP1 and SRD5A2 levels in the detection of early hepatocellular carcinoma.2010

    • 著者名/発表者名
      Tsunedomia R
    • 雑誌名

      Int J Oncol 36

      ページ: 205-212

    • 関連する報告書
      2009 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Rapid and quantative detection of CpG-methylation status using TaqMan PCR combined with methl-binding-domain polypeptide.2009

    • 著者名/発表者名
      Kimura N
    • 雑誌名

      Clin Biochem 42

      ページ: 1113-1122

    • 関連する報告書
      2009 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Methylation of multiple genes as molecular markers for diagnosis of a small, well-differentiated hepatocellular carcinoma.2009

    • 著者名/発表者名
      Moribe T
    • 雑誌名

      Int J Cancer 125

      ページ: 388-397

    • 関連する報告書
      2009 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Concomitant overexpression of heat-shock protein 70 and HLA class-I in hepatitis C virus-related hepatocellular carcinoma.2009

    • 著者名/発表者名
      Yoshida S
    • 雑誌名

      Anticancer Research 29

      ページ: 539-544

    • 関連する報告書
      2008 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Glycolysis module activated by hypoxia-inducible factor lalpha is related to the aggressive phenotype of hepatocellular carcinoma2008

    • 著者名/発表者名
      Hamaguchi T.
    • 雑誌名

      International Journal of Oncology 33

      ページ: 725-731

    • 関連する報告書
      2008 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Relation between serum levels of cell-free DNA and inflammation status in hepatitis C virus-ralated hepatocellular careinoma.2008

    • 著者名/発表者名
      Iida M.
    • 雑誌名

      Oncology Reports 20

      ページ: 761-765

    • 関連する報告書
      2008 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Identification of novel aberrant methylation of BASP1 and SRD5A2 for early diagnosis of hepatocellular carcinoma by genome-wide search.2008

    • 著者名/発表者名
      Moribe T.
    • 雑誌名

      International Journal of Oncology. 33

      ページ: 949-958

    • 関連する報告書
      2008 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Translational microarray systems for outcome prediction of hepatocellular careinoma.2008

    • 著者名/発表者名
      Iizuka N.
    • 雑誌名

      Cancer Science 99

      ページ: 659-665

    • 関連する報告書
      2008 実績報告書
    • 査読あり
  • [学会発表] 肝癌患者における血中メチル化CCND2遺伝子の術前測定による早期肝内再発予測2009

    • 著者名/発表者名
      飯田通久
    • 学会等名
      第20回日本消化器癌発生学会総会
    • 発表場所
      広島・オリエンタルホテル広島
    • 年月日
      2009-11-26
    • 関連する報告書
      2009 実績報告書
  • [学会発表] BASP1とSRD5A2遺伝子のDNAメチル化異常に基づく早期肝細胞癌診断2009

    • 著者名/発表者名
      恒富亮一
    • 学会等名
      第68回日本癌学会学術総会
    • 発表場所
      横浜・パシフィコ横浜
    • 年月日
      2009-10-03
    • 関連する報告書
      2009 実績報告書
  • [学会発表] 肝癌の独立した予後規定因子としての血清メチル化RASSF1A遺伝子2009

    • 著者名/発表者名
      飯塚徳男
    • 学会等名
      第68回日本癌学会学術総会
    • 発表場所
      横浜・パシフィコ横浜
    • 年月日
      2009-10-02
    • 関連する報告書
      2009 実績報告書
  • [学会発表] HCV陽性肝細胞癌における転写調節因子RDBPの発現意義2009

    • 著者名/発表者名
      飯田通久
    • 学会等名
      第64回日本消化器外科学会総会
    • 発表場所
      大阪・国際会議場
    • 年月日
      2009-07-16
    • 関連する報告書
      2009 実績報告書
  • [学会発表] HCV陽性肝癌における血清cell-free DNA上昇の意義:進展と炎症に関する検討2009

    • 著者名/発表者名
      飯田通久
    • 学会等名
      第109回日本外科学会定期学術集会
    • 発表場所
      福岡・国際会議場
    • 年月日
      2009-04-03
    • 関連する報告書
      2009 実績報告書
  • [学会発表] Influence of the ID2 on the anti-tumor activity of histone deacetylase inhibitor in hepatocellular carcinoma cells2009

    • 著者名/発表者名
      恒富亮一
    • 学会等名
      The 19^<th> Conference of the Asian Pacific Association for the Study of the Liver
    • 発表場所
      香港
    • 年月日
      2009-02-14
    • 関連する報告書
      2008 実績報告書
  • [学会発表] Possible new biomarkers for diagnosis of early hepatocellular carcinoma2008

    • 著者名/発表者名
      小川恭司
    • 学会等名
      第31回日本分子生物学会年会
    • 発表場所
      神戸
    • 年月日
      2008-12-11
    • 関連する報告書
      2008 実績報告書
  • [学会発表] HCV陽性肝癌の血清メチル化マーカーとAFP, PIVKA-II によるハイブリッド高精度診断システム2008

    • 著者名/発表者名
      飯塚徳男
    • 学会等名
      第7回消化器病フォーム
    • 発表場所
      東京
    • 年月日
      2008-11-29
    • 関連する報告書
      2008 実績報告書
  • [学会発表] HCV陽性肝細胞癌の血清Cell-freeDNA量と炎症2008

    • 著者名/発表者名
      飯田通久
    • 学会等名
      第21回バイオセラピィ学会学術集会
    • 発表場所
      東京
    • 年月日
      2008-11-19
    • 関連する報告書
      2008 実績報告書
  • [学会発表] 血液検査のハイブリッド化による小肝癌診断2008

    • 著者名/発表者名
      飯塚徳男
    • 学会等名
      第21回バイオセラピィ学会学術集会
    • 発表場所
      東京
    • 年月日
      2008-11-19
    • 関連する報告書
      2008 実績報告書
  • [学会発表] 血清メチル化遺伝子と従来マーカーのハイブリット化によるHCV陽性肝癌の高精度早期診断2008

    • 著者名/発表者名
      飯塚徳男
    • 学会等名
      第67回日本癌学会学術総会
    • 発表場所
      名古屋
    • 年月日
      2008-10-29
    • 関連する報告書
      2008 実績報告書
  • [学会発表] 肝細胞癌におけるID2レベルとヒストンデアセチラーゼ阻害剤2008

    • 著者名/発表者名
      原田紗和子
    • 学会等名
      第67回日本癌学会学術総会
    • 発表場所
      名古屋
    • 年月日
      2008-10-28
    • 関連する報告書
      2008 実績報告書
  • [学会発表] 解糖系モジュールと肝細胞癌(HCC)の進展2008

    • 著者名/発表者名
      飯塚徳男
    • 学会等名
      第19回日本消化器癌発生学会総会
    • 発表場所
      大分
    • 年月日
      2008-08-29
    • 関連する報告書
      2008 実績報告書
  • [図書] 消化器外科学レビュー20092009

    • 著者名/発表者名
      吉村 清
    • 総ページ数
      270
    • 出版者
      総合医学社
    • 関連する報告書
      2008 実績報告書

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公開日: 2008-04-01   更新日: 2016-04-21  

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