| 研究課題/領域番号 |
20K06464
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 基金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 審査区分 |
小区分42040:実験動物学関連
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| 研究機関 | 東京大学 |
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研究代表者 |
恒川 雄二 東京大学, 医科学研究所, 助教 (80733352)
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| 研究期間 (年度) |
2020-04-01 – 2024-03-31
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| 研究課題ステータス |
完了 (2023年度)
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| 配分額 *注記 |
4,420千円 (直接経費: 3,400千円、間接経費: 1,020千円)
2022年度: 260千円 (直接経費: 200千円、間接経費: 60千円)
2021年度: 1,820千円 (直接経費: 1,400千円、間接経費: 420千円)
2020年度: 2,340千円 (直接経費: 1,800千円、間接経費: 540千円)
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| キーワード | AAV / LsCre / Creノックイン / Cre de novo ノックイン / ノックイン / リコンビネース |
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| 研究開始時の研究の概要 |
ヒト型のシワのある大脳皮質がどのように発生するかを明らかにするにはマウス以外の高等哺乳類モデル動物を使う必要がある。しかし、それらの動物ではコンディショナルノックアウト (cKO)、リニエージトレーシング、機能獲得実験などの基本技術に必須であるリコンビネースをノックインすることができない。本研究では申請者の開発した体細胞に対するゲノム編集技術を改良し、食肉目のフェレットを複雑脳モデルとして、発生期においてcKO、リニエージトレーシング、細胞特異的機能獲得実験を可能にするCre-LoxPシステムの適用を目指す。
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| 研究成果の概要 |
遺伝子工学的に細胞特異的な遺伝子発現をさせるためのノックイン（KI）モデル動物の作製が困難な生物種に対応できるように、さまざまな動物種において細胞特異的な遺伝子発現を実現する技術の開発を目指した。 ノックインを行う際、ドナーとして細胞内に導入したCreが意図せず発現してしまい、目的以外の細胞で遺伝子が発現してしまう現象が観察された。そこで、ノックインされるまでドナーから非特異的な遺伝子発現を抑えるためにコドン改変を行ったリークレスCreを開発した。全身で遺伝子導入のできるアデノ随伴ウイルス（AAV）にLsCreを組み込んで遺伝子導入を試み効率的にAAVを製造、精製する技術開発も行い、報告した。
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| 研究成果の学術的意義や社会的意義 |
研究の過程で開発し、論文として報告したアデノ随伴ウイルス（AAV）ベクターの新規高効率精製法は、濃縮、バッファー置換に用いる中空糸を用いた全く新規の精製方法であり、今後AAVベクターを用いた研究、遺伝子治療を加速させる学術的、社会的意義の高い成果だと考えられる。
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