| 研究課題/領域番号 |
21K07962
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 基金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 審査区分 |
小区分53010:消化器内科学関連
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| 研究機関 | 岡山大学 |
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研究代表者 |
加藤 博也 岡山大学, 大学病院, 准教授 (60619039)
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| 研究分担者 |
堤 康一郎 岡山大学, 大学病院, 助教 (40610910)
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| 研究期間 (年度) |
2021-04-01 – 2024-03-31
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| 研究課題ステータス |
完了 (2023年度)
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| 配分額 *注記 |
4,160千円 (直接経費: 3,200千円、間接経費: 960千円)
2023年度: 1,430千円 (直接経費: 1,100千円、間接経費: 330千円)
2022年度: 1,430千円 (直接経費: 1,100千円、間接経費: 330千円)
2021年度: 1,300千円 (直接経費: 1,000千円、間接経費: 300千円)
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| キーワード | 胆道癌 / オルガノイド / microRNA / 治療標的 / プロテオミクス / 診断マーカー / 細胞外小胞 / エクソソーム |
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| 研究開始時の研究の概要 |
胆管癌、胆嚢癌などの胆道癌はいまだ予後不良な疾患であり、新規診断・新規治療法の開発が急務である。
本研究の目的は、胆道由来の正常および腫瘍オルガノイドが分泌する細胞外小胞（EVs）中のmicroRNAやタンパク質のプロファイルを比較解析し、高精度で早期診断にも有用な胆道癌診断マーカーを同定することである。従来の2D培養やマウスモデルでは困難なアプローチであり、その成果は、癌幹細胞を標的とした治療開発や癌由来のEVsを選択的に捕捉するマーカーの同定にも発展でき、極めて有意義な研究になると考える。
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| 研究実績の概要 |
マウス由来胆道の正常と腫瘍オルガノイド（KRAS/TP53変異）の分子生物学的な比較解析を行い、より重要な診断マーカーや治療標的の同定を試みた。比較解析は、①正常vs腫瘍のオルガノイド、②正常vs腫瘍のオルガノイド由来細胞外小胞（EV）をmicroRNAマイクロアレイやプロテオーム解析にて行った。これまでに得られた結果として、1）①のmiRNA解析により、マウスの胆道腫瘍およびヒト胆道腫瘍でも低発現していた癌抑制性のmiR-Aを治療標的候補として同定、2）胆嚢癌細胞株3種（NOZ、G415、TGBC2TKB）を用いたin vitroの実験で、miR-Aの強制発現により、細胞増殖能抑制、アポトーシス誘導を確認、3）細胞株のスフェロイド培養でも同様の増殖抑制効果が確認、4）その標的遺伝子として、抗アポトーシス物質であるSurvivinや、CDK6、snailが関与している可能性が示唆、5）in vivo実験でのmiR-Aの局所投与により抗腫瘍効果を認め、治療に応用できる可能性が示唆。6）さらにRNA-Seq解析にて、miR-A強制発現により主に細胞周期制御に関する遺伝子群がエンリッチしていること確認した。また、7）以前胆嚢癌患者の血清EVや臨床データベースを用いた解析から、miR-451aも治療標的候補となる可能性を同定しており（Ueta E, Tsutsumi K, et al. Sci Rep 2021）、腫瘍オルガノイドへのmiR-451aの強制発現での検証にて増殖抑制効果を確認した。以上から、胆道オルガノイドモデルは新しい診断や治療標的の同定やその検証に利用可能であることが示唆され、今後の臨床応用にもつながる結果が得られた。
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