| 研究課題/領域番号 |
21K08414
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 基金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 審査区分 |
小区分54010:血液および腫瘍内科学関連
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| 研究機関 | 京都大学 |
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研究代表者 |
蝶名林 和久 京都大学, 医学研究科, 特定病院助教 (00646010)
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| 研究期間 (年度) |
2021-04-01 – 2024-03-31
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| 研究課題ステータス |
完了 (2023年度)
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| 配分額 *注記 |
4,290千円 (直接経費: 3,300千円、間接経費: 990千円)
2023年度: 1,430千円 (直接経費: 1,100千円、間接経費: 330千円)
2022年度: 1,300千円 (直接経費: 1,000千円、間接経費: 300千円)
2021年度: 1,560千円 (直接経費: 1,200千円、間接経費: 360千円)
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| キーワード | 非定型3q26転座型骨髄性腫瘍 / EVI1活性化 / 転写制御領域 / 疾患特異的iPS細胞 / BET阻害剤 / スーパーエンハンサー |
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| 研究開始時の研究の概要 |
骨髄異形成症候群（MDS）などの骨髄性腫瘍では高頻度にEVI1 (Ectopic viral integration site 1) 遺伝子が高発現し、発症、進展及び治療抵抗性に寄与している。EVI1高発現の機序としてはEVI1遺伝子の再構成による場合が多いが、腫瘍化との関連が未知のものが数多く存在する。本研究は、十分量の患者検体を得ることが困難なことが多い非定型EVI1遺伝子再構成を持つMDS症例から、リプログラミング技術を用いて疾患特異的iPS細胞を樹立することで、詳細なゲノム・エピゲノム解析及び機能解析を行いEVI1活性化の機構を解明し、EVI1発現を抑制するような新規治療法を開発することを目的とする。
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| 研究実績の概要 |
当初の研究計画に沿って、令和４年度に下記の進捗があった。本研究成果をまとめ論文投稿中である。
２）MDS-iPS細胞を用いた病態再現：令和4年度に引き続き、非定型EVI1転座陽性MDS症例の血液細胞から樹立した複数のMDS-iPS細胞株、正常T-iPS細胞株、健常者iPS細胞株を胚様体形成法を用いて造血誘導し、造血前駆細胞（CD45+34+）、赤芽球系細胞（CD235a+）の割合を検討したところ、正常T-iPS細胞株と比較してMDS-iPS細胞株において有意にCD34陽性率の上昇、CD235a陽性率の低下を認め、元の症例で認めた血液成熟障害を反映していると考えられた。また造血前駆細胞分画でソートして、GM-CSF、G-CSF、IL3、IL-6、SCF、EPO存在下でコロニーアッセイを行ったところ、MDS-iPS株では骨髄球系、赤芽球系いずれのコロニー形成能も著明に障害されていた。
３）MDS-iPS細胞の網羅的エンハンサー解析：令和4年度に引き続き、MDS-iPS細胞株、健常者iPS細胞株を再分化させた造血前駆細胞のゲノムDNAを材料に、H3K27acのChIP-seqにより網羅的な転写制御領域の解析を行い、MDS-iPS細胞由来造血前駆細胞特異的に活性が亢進しているプロモーター、エンハンサー領域を同定した。
４）スーパーエンハンサーを標的としたEVI1発現抑制：複数のMDS-iPS細胞株由来造血前駆細胞を用いて、３）で同定された転写制御領域を標的としてBET阻害剤JQ1によるEVI1発現抑制効果を確認し、Annexin Vアッセイで用量依存性のアポトーシス誘導効果を確認した。健常者iPS細胞株でも同様の実験を行ったが、JQ1によるEVI1発現抑制、アポトーシス誘導効果を認めなかった。
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